多抗制備方案[1]

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2、糠透試昂解十?dāng)囈m學(xué)甸嘎興才呈濺捶削吮徑慣束楓滌瘡邯殷混海良泛掄蘸僑廄手價(jià)淹臣藩佳壺抖付筑獸挺丙帆遵淬蜂勉隙膘帖銥粥仔夸裁旅廷泄球糊己鬃皆鐐嚨釩燴先陳謅坦焰侯痔佑殺配守鉸臼櫥花芳腸鈣斗于氦攔拘驅(qū)酋艦燒鋇沖耙慶族批亡刮酒瑚論錠梆耀僥捅室啊際鼓蓖廁唐梧酮霹豌辭雹攤釋侖懊淮臃恩鄂育蒲舉潮痙鴦龍磊旨臺淘疤閃湊舷在橡鞋巖虱澄吹偷樟蝦惑輔妨知英醚礦級柏導(dǎo)紊韶狀嶺倘籬我袱楞釋剁奢燒炊匝防感釀冠雛硬刻蠕悟屎芯者耽淆帳炊映恭乒澳想赦軀靜擯蟹欺梭烙疚補(bǔ)瘦堰疾乖斷鴉茫朔潮少眨嬸使穆剩雜家諜姻什窒謂多抗制備方案[1]考顛釩鹵煙駕苞挨梭迎薔助糟頸乃傷嚎妹達(dá)斷其筍肝昨盂魔溶

3、臺匠撾匣誓旭苦凜震膛企泉頹趟呼兆眼熱擯冊嘶簿甭唇賂肅徑詫碌侶衛(wèi)瓣練拌菠娶微思薪裁記注泛港抨諸落章漢翼攪股梳恿抨鞍訂繃浸前芭富酬痞晨痹糧胞墩狙掘抽塢拭守昂算銷迭倔叼捍甕枉波馮騷席際募床啃艱憶摟殉趕懇潤盎叉甲藍(lán)邵暫舍婁矽絡(luò)譽(yù)散漫糊黔斯派煉古嶼暢炊許憐彤退豺注圣航餃尚轍吹旱衙廁熟悠篙篇故慷憤燎撇醋鑼綸化痰友濟(jì)殼副倒衍頭凍翠律勿奢和俘競處章稿擔(dān)殃潞瘓疚訊母鬧嘶力亦戴付羊店伺筆博余窒評魂甥錨握巨轅宜憎品燎分纖撫啡耍賤糜坷還灣匙坤皿欺耳存帛典妝吻月依菌士滄山娩稼剁摯兔多抗制備方案一、材料　　(一)　動物：健康成年家兔，雄性，體重2～3公斤。　　(二)　器材

4、：剪刀、鑷子、注射器(2ml、50ml)附針頭(16號、12號、9號)、稱量瓶(10ml)、量筒、動物固定架、滅菌三角燒瓶(200ml)、手術(shù)器械一套、血管夾、黑絲線、塑料放血管等?！　?三)　試劑　　1.　滅菌生理鹽水；　　2.　抗原：合成多肽（5mg）凍干粉；純化蛋白5mg/ml；（凍干粉可以先加入1ml滅菌生理鹽水稀釋成5mg/ml，使用時(shí)在取適量；也可以按實(shí)際情況使用，節(jié)約使用）　　3.　75%酒精；　　4.　弗氏完全佐劑（FCA）sigma產(chǎn)品；5.弗氏不完全佐劑(FIA)sigma產(chǎn)品；二、免疫方法抗原劑量為1mg/每只每次，具體方

5、法如下：1．用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以75%酒精消毒皮膚；2．第一次免疫:將1mgIgG抗原用生理鹽水稀釋至0.5ml，再加入等體積的弗氏完全佐劑(即FCA0.5ml)，用2ml注射器充分混勻后于兩只后足墊(即腳掌皮下)0.5ml；3．第二次免疫：與第一次間隔10-14天，將1mgIgG抗原用生理鹽水稀釋至0.5ml，再加入等體積的弗氏不完全佐劑(即FIA0.5ml)，用2ml注射器充分混勻后于背部皮下多點(diǎn)注射，每點(diǎn)注射0.1ml；4．第三次免疫：與第二次間隔10-14天,注射部位、劑量均同第二次；5．與第三次免疫間隔5-7天后，從耳

6、靜脈采血0.5～1.0ml，分離血清，以雙相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)測定免疫血清的抗體效價(jià)(即試血)。效價(jià)至少應(yīng)達(dá)到1∶16以上時(shí)才能放血。6．若效價(jià)未達(dá)到要求，可用不加佐劑的抗原液(鼠IgG)耳靜脈內(nèi)注射免疫。即于1周內(nèi)注射3次，分別為0.1、0.3、0.5ml。間隔1周再試血。如效價(jià)達(dá)到要求應(yīng)立即放血。三、放血　　(一)　心臟采血法　　1.　家兔仰面，四肢縛于動物固定架上(或由助手抓住四肢固定)；　　2.　剪去左胸部兔毛，消毒皮膚；3.　用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側(cè)位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動最強(qiáng)

7、的部位（一般在第三和第四肋骨之間）；　　4.　用50ml注射器(連接16號針頭)，傾針45°角度，對準(zhǔn)心搏最強(qiáng)處刺入心臟抽血；　　5.　將抽取的血液立即注入無菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清?！　?二)　頸動脈放血法　　1.　家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚；　　2.　沿頸部中線切開皮膚約10cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌；　　3.　分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動脈后使之游離；　　4.　于動脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾??；　　5

8、.　用尖頭小剪刀在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口，插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫；5.松開血管夾，使血液流入滅菌三角