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1、不同成熟度棉花種子脂肪酶活性測定指導(dǎo)老師：瑪依拉老師作者：米耶賽.買買提艾力班級：生技102班學(xué)號：103135219前言試驗材料與方法結(jié)果與分析討論內(nèi)容簡介結(jié)論前言棉花是世界上最主要的農(nóng)作物之一,也是我國重要的經(jīng)濟作物.棉花生產(chǎn)實踐表明,棉花種子成熟度與棉花生產(chǎn)保全苗、齊苗、壯苗有直接關(guān)系.成熟度好的種子不僅發(fā)芽率高,更重要的是田間出苗率高,出苗整齊健壯,即種子活力高.所以,種子成熟度是反映種子活力的重要內(nèi)在指標(biāo).不同成熟度的棉花種子所含的脂肪酶和它的活性不同,因此選取不同成熟度的棉花種子提取脂肪酶并且測定其活力根據(jù)實驗結(jié)果找出活力較高的棉花種子對以后的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)提供依據(jù).二、材料與
2、方法2.1試驗材料2.1.1棉花種子棉花惠遠710品種不同采收期吐絮當(dāng)天、吐后第10天、吐絮后20天、混合收的種子為實驗材料.參與本實驗的品種是新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院棉花育種教研室提供.2.1.2實驗儀器與藥品儀器：高速勻漿機，離心機,冰谷,鑷子,剪刀,發(fā)芽盒，移液搶，離心機，恒溫水溶谷，燒杯，PH測定紙,定容瓶,玻璃棒，三角膠頭滴管,電磁攪拌器,雙層紗布,烘干箱.藥品：升汞，蔗糖,PH試紙，乙酸銅,Twenn-20和橄欖油,EDTA,KCI,MgCI2,DTT,磷酸緩沖液,雙氧水,吡啶的溶液,橄欖油,脂肪酸顯色劑,乳酸苯酚透明液，蒸餾水,95%酒精,4%聚乙烯醇,橄欖油,底物溶液，氫氧
3、化鈉，酚酞指示液.2.2試驗方法2.2.1實驗處理選用細(xì)沙為發(fā)芽床，發(fā)芽溫度為常溫30℃～35℃溫度和沙床，共4個處理的，每處理3個重復(fù)，每重復(fù)120粒種子。2.2.2室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽實驗2.2.2.1砂床準(zhǔn)備2.2.2.2種子處理2.2.2.3棉花葉子處理我將發(fā)芽第4天的棉花幼苗用于做實驗（如圖所示）我將長好的子葉拔下來裝到空的發(fā)芽盒里面.然后把它消毒了以后做實驗材料.第四天發(fā)芽的棉花種子2.2.3棉花種子脂肪酶的提取參考Huang[11]的方法,將種子或幼苗蒸餾水洗凈后,取兩片子葉加入1.0ml含0.6mol/L蔗糖,lmmol/LEDTA10mrnol/LKCI,lmmol/LMg
4、C12,2mmol/LDTT及0.15mmol/LTrieine,pH為7.5的酶提取液,在4度冰浴研磨,勻漿經(jīng)過濾除去組織碎片,即可直接作為酶的粗提取液測酶活性.在部分實驗中,為除去勻漿中本身所含有脂類物質(zhì)的干擾,將濾液在104g×10min下離心,棄去浮在表層的脂肪及沉淀物,用上清液部分作為脂肪酶酶源.2.2.4脂肪酶活性測定法電位滴定法①按pH計使用說明書進行儀器校正；②取兩個100mL燒杯，分別作為空白A和樣品B，分別加入底物溶液4mL和磷酸緩沖液5mL，再于A中加入95％酒精15.00mL，于40℃±0.2℃水浴中預(yù)熱5min，然后各加1mL酶液，立即混勻計時，準(zhǔn)確反應(yīng)15
5、min后，于B中立即補加15.00mL95％酒精終止反應(yīng)取出。③在燒杯中加入一轉(zhuǎn)子，置于電磁攪拌器上，邊攪拌，邊用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至pH10.3，為滴定終點，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。指示劑滴定法①取兩個100mL三角瓶，分別作為空白A和樣品B，分別加入底物溶液4mL和磷酸緩沖液5mL，再于A中加入95％酒精15.00mL，于40℃±0.2℃水浴中預(yù)熱5min，然后各加1mL酶液，立即混勻計時，準(zhǔn)確反應(yīng)15min后，于B中立即補加15.00mL95％酒精終止反應(yīng)，取出。②于A、B瓶中各酚酞兩滴，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至微紅色并保持30s不退色為滴定終點，記錄消耗氫氧化
6、鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。三，結(jié)果與分析3.1兩種測定方法對脂肪酶活性的比較測定脂肪酶活力是我們用了電位滴定法和指示劑滴定法等兩種方法，測定結(jié)果如圖表（1）所示，從下面圖可以看出，電位滴定法和指示劑滴定測定方法的測定結(jié)果在數(shù)值上有一定差異，不能相互替代。用指示劑滴定法來分別測定棉花種子吐絮當(dāng)天，第10天，第20天，混合種子的結(jié)果比滴定法的結(jié)果高，那是因為指示劑滴定法試驗過程中，用NaOH滴定生成的脂肪酸,以酚酞作指示劑。滴定NaoH的體積多一點,在棉花脂肪酶的測定中,由于棉子含油分高、棉酚等的干擾,指示劑顯色變化緩慢等當(dāng)點顯色突變很難準(zhǔn)確把握棉花種子脂解酶顯著的堿性特性。圖表(1）電位滴定法
7、與指示劑滴定法對脂肪酶活力變2.2不同溫度對脂肪酶活力的影響圖（2）吐絮當(dāng)天，吐絮后第10天，吐絮后20天，混合種子活力與溫度的關(guān)系2.3不同成熟度的棉花種子的脂肪酶活力比較不同成熟度對種子活力的影響不同，由表可以看出隨著棉花種子吐絮后采收期的長，棉花種子的脂肪酶活力指數(shù)逐漸降低,以吐絮后第10天的最高,說明其活力最強,其次為吐絮當(dāng)天的.測定方法吐絮0號吐絮10號吐絮20號混合種子電位滴定法Ⅰ6.66u/g10.661u/g6.318u/g6.16u/g指
