資源描述：
《響應(yīng)葡萄根瘤蚜侵染的擴(kuò)展蛋白基因篩選及其多克隆抗體的制備》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、園藝學(xué)報(bào)，2016，43(1)：15–24.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0574；http：//www.ahs.ac.cn15響應(yīng)葡萄根瘤蚜侵染的擴(kuò)展蛋白基因篩選及其多克隆抗體的制備1211,*季興龍，韓寧，翟衡，杜遠(yuǎn)鵬12（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院，作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安271018；齊魯工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，濟(jì)南250353）摘要：以對(duì)葡萄根瘤蚜敏感的‘克瑞森無核’葡萄（Vitisvinifera‘CrimsonSeedless’）組
2、培苗和抗性砧木‘1103P’組培苗為試材，通過熒光定量PCR技術(shù)從擴(kuò)展蛋白基因家族中篩選到經(jīng)根瘤蚜侵染后表達(dá)上調(diào)的擴(kuò)展蛋白基因家族成員VvEXPA1。采用RT-PCR方法克隆到VvEXPA1基因片段，連接至原核表達(dá)載體pET-32a中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DE3菌株，測(cè)序確定構(gòu)建的重組載體pET32a-VvEXPA1開放閱讀框正確，并經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)了融合蛋白。該蛋白以包涵體的形式存在，純化后免疫新西蘭兔，制備擴(kuò)展蛋白多克隆抗體，通過Western-blot和ELISA檢測(cè)抗體的特異性及效價(jià)。結(jié)果顯示制備的抗體具有較高的特異性，ELISA顯示效價(jià)為
3、1︰51200。關(guān)鍵詞：葡萄；根瘤蚜；擴(kuò)展蛋白；VvEXPA1；多克隆抗體制備中圖分類號(hào)：S663.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0513-353X（2016）01-0015-10IdentificationofVvEXPGenefromGrapeRootsInfectedbyPhylloxeraandPreparationofPolyclonalAntibodytoGrapeExpansin1211,*JIXing-long，HANNing，ZHAIHeng，andDUYuan-peng1（CollegeofHorticultureScienc
4、eandEngineering，ShandongAgriculturalUniversity，StateKeyLabofCropBiology，2Tai’an，Shandong271018，China；CollegeofBioengineering，QiluTechnologyofUniversity，Ji’nan250353，China）Abstract：BasedonqRT-PCRmethod，anexpansin（VvEXPA1）wasacquiredandinvestigatedfrominfectedCrimsonSeedlessg
5、rapeand1103Pgraperootstockinpresentstudy.VvEXPA1wasclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET32aafteridentificationbyenzymaticdigestionandsequencing，andthentherecombinantplasmidwithVvEXPA1wastransformedintoE.coliDE3.TheresultsshowedthattheproteinwashighlyexpressedinE.coliandt
6、hemolecularweightoftherecombinantproteinwas41kD.Thespecificantibodywaspreparedbyimmunizingrabbitwiththepurifiedprotein，andthendetectedbyWestern-blottingandELISA.Finally，thehighspecificantibodywasobtainedandthetitersofanti-VvEXPA1antibodywere1︰51200.Keywords：grape；phylloxera
7、；expansin；VvEXPA1；poly-antibodypreparation收稿日期：2015–11–10；修回日期：2016–01–18基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31201609）；山東省中青年科學(xué)家基金項(xiàng)目（BS2012NY007）；山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（ZR2013CQ022）；高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（20113702120007）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：duyuanpeng001@163.com）JiXing-long，HanNing，ZhaiHeng，DuY
8、uan-peng.IdentificationofVvEXPgenefromgraperootsinfectedbyphylloxeraandpreparation
