細(xì)菌的純種分離

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1、細(xì)菌的純種分離、培養(yǎng)和接種技術(shù)及菌落形態(tài)的觀察班級：09環(huán)科二班姓名：李建文學(xué)號：200930260213一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準(zhǔn)備工作。（2）了解配制微生物培養(yǎng)基的基本原理，掌握常規(guī)的配制、分裝培養(yǎng)基的方法。（3）學(xué)會各類物品的包裝、配制（稀釋水等）和滅菌技術(shù)。（4）從湖水中分離、培養(yǎng)微生物，掌握常用的分離微生物的方法。（5）學(xué)會接種技術(shù)。（6）觀察分離出來的幾種細(xì)菌的個體形態(tài)及與其相應(yīng)的菌落形態(tài)特征。（7）通過觀察和比較細(xì)菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的菌落特征，達(dá)到初步鑒別上述微生物

2、的能力二、實(shí)驗(yàn)原理：1、培養(yǎng)基原理：培養(yǎng)基是微生物生長的基質(zhì)，是按照微生物營養(yǎng)、生長繁殖的需要，由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵及微量元素和水，按一定的體積分?jǐn)?shù)配制而成。調(diào)整合適的pH，經(jīng)高溫滅菌后以備培養(yǎng)微生物之用。本實(shí)驗(yàn)配制固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基的成分與液體相同，僅在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑使呈固態(tài)。通常加入質(zhì)量濃度15-20g∕L的瓊脂為固體培養(yǎng)基。2、滅菌原理:本次實(shí)驗(yàn)采取加壓蒸汽滅菌法。加壓蒸汽滅菌器是能耐一定壓力的密閉金屬鍋，加壓滅菌的原理在于提高滅菌器內(nèi)的蒸汽溫度來達(dá)到滅菌的目的。3、分離純化原理

3、：本實(shí)驗(yàn)使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群體分散成能在培養(yǎng)基上長成單個菌落的分離方法。此法加樣量不宜太多，只能在0.5mL以下，培養(yǎng)時(shí)起初不能倒置，現(xiàn)正置一段時(shí)間等水分蒸發(fā)后倒置。4、微生物的接種原理：接種就是將一定量的微生物在無菌操作條件下轉(zhuǎn)移到另一無菌的并適合該菌生長繁殖所需的培養(yǎng)基中的過程。本次實(shí)驗(yàn)采取斜面接種法，使用到的接種工具是接種環(huán)，接種環(huán)一般用電爐絲或者鎳絲，環(huán)的柄為金屬材質(zhì)，其后端套上絕熱材料套。5、菌落形態(tài)觀察原理：由于微生物個體表面結(jié)構(gòu)、分裂方式、運(yùn)動能力、生理特性及產(chǎn)生色素的能力等各不相同，因

4、而個體及它們的群體在固體培養(yǎng)基上生長狀況各不一樣。按照微生物在固體培養(yǎng)基上形成的菌落特征，可從菌落的形狀、大小、表面結(jié)構(gòu)、邊緣結(jié)構(gòu)、菌叢高度、顏色、透明度、氣味、粘滯性、質(zhì)地軟硬、表面光滑粗糙等情況，初步辨別是何種類型的微生物。一、實(shí)驗(yàn)器皿和材料：1、樣品：人工湖底泥2、儀器：高壓蒸汽滅菌器、干燥箱、酒精燈或煤氣燈、稀釋水、試管、刻度移液管、錐形瓶、燒杯、量筒、滴管、吸水紙、鑷子、搪瓷杯、高溫滅菌鍋、移液槍（槍頭）、藥物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉網(wǎng)、藥匙、鐵架、表面皿、濾紙、pH試紙和棉花、接種環(huán)、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、4

5、大類菌落（培養(yǎng)皿）3、試劑或材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和瓊脂等二、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）玻璃器皿的準(zhǔn)備1、洗滌玻璃器皿在使用前必須洗滌干凈。培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自來水沖凈。移液管先用洗液浸泡，再用水沖洗干凈。洗刷干凈的玻璃器皿自然晾干或放入干燥箱中烘干、備用。2、包裝（1）移液槍和槍頭的包裝：移液管的吸端用細(xì)鐵絲（或牙簽）將少許棉花塞入構(gòu)成1-1.5cm長的棉塞，起過濾作用（以防細(xì)菌吸入口中，并避免將口中細(xì)菌吹入管內(nèi)）。棉塞要塞的松緊適宜，吸時(shí)既能通氣，又不致使棉花滑入管內(nèi)。然后將塞好

6、棉花的移液管的尖端，放在4-5cm寬的長紙條的一端，移液管與紙條約成30度夾角，折疊包裝紙包住移液管的尖端，用左手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，紙條螺旋式地包在移液管外面，余下的紙折疊打結(jié)，待滅菌。（2）培養(yǎng)皿的包裝：培養(yǎng)皿由一底一蓋組成一套，用牛皮紙或報(bào)紙將10套培養(yǎng)皿（皿底朝里，皿蓋朝外，5套、5套相對而放）包好。（3）硅膠塞：。硅膠塞四周應(yīng)緊貼管壁和瓶壁，不能有折皺，以防空氣微生物沿硅膠塞折侵入。硅膠塞的直徑和長度視試管和錐形瓶的大小而定，一般約3∕5塞入管內(nèi)。試管、錐形瓶塞好硅膠塞后，用牛皮紙包裹并用細(xì)繩或橡皮

7、筋捆扎好，放在銅絲簍內(nèi)待滅菌。（二）培養(yǎng)基的配制1.配制溶液取一定容量的燒杯盛入100mL蒸餾水（有時(shí)也可用自來水），按培養(yǎng)基配方（0.5g牛肉膏、1g蛋白胨、0.5gNaCl、2.0g瓊脂）逐一稱取各種成分，依次加入水中溶解。蛋白胨、肉膏等可加熱促進(jìn)溶解，待全部溶解后，加水補(bǔ)足因加熱蒸發(fā)的水量。在制備固體培養(yǎng)基加熱融化瓊脂時(shí)要注意攪拌，避免瓊脂糊底燒焦。2.調(diào)節(jié)pH一般剛配好的培養(yǎng)基是偏酸性的，故要用質(zhì)量濃度為100g∕LNaOH調(diào)pH至7.2-7.4.應(yīng)緩慢加入NaOH，邊加邊攪拌，并不時(shí)用pH試紙測試。調(diào)整至所需的

8、pH。3.分裝（1）分裝試管：將培養(yǎng)基趁熱加至漏斗中。分裝時(shí)左手并排地拿數(shù)根試管，右手控制彈簧夾，將培養(yǎng)基依次加入各試管，用于制造斜面培養(yǎng)基時(shí)，一般裝量不超過試管高度（15mm*150mm）的1∕5.分裝時(shí)謹(jǐn)防培養(yǎng)基沾在管口上，否則會使棉塞沾上培養(yǎng)基而造成染菌。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，N