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《膠體金快速免疫診斷技術(shù)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、免疫層析快速診斷技術(shù)層析法技術(shù)優(yōu)勢(shì):簡(jiǎn)單現(xiàn)場(chǎng)快速1.打開(kāi)包裝取出試紙條2.直接插入待測(cè)樣品中3.目測(cè)讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）與常規(guī)診斷方法相比優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)快速：全部檢測(cè)過(guò)程僅需3-10分鐘。簡(jiǎn)便：不需其它任何儀器設(shè)備，操作也極其簡(jiǎn)單，無(wú)需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時(shí)隨地進(jìn)行。廉價(jià)：?jiǎn)蝹€(gè)測(cè)試條成本極低可單份檢測(cè)：對(duì)標(biāo)本既能成批檢測(cè)，又可單份檢測(cè)，可立刻拿到結(jié)果，不必等待。穩(wěn)定性好：金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。檢測(cè)標(biāo)本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種檢查定量問(wèn)題靈敏度問(wèn)題技術(shù)應(yīng)用類別應(yīng)用領(lǐng)域檢測(cè)的物質(zhì)人類醫(yī)學(xué)各級(jí)醫(yī)院,血站,CDC,防疫站,診斷中心；家庭自檢；商檢系統(tǒng)；邊檢口
2、岸；公安系統(tǒng).傳染?。ㄒ腋挝屙?xiàng),HIV,SARS等）標(biāo)志物（AFP、肌鈣蛋白、糞便血紅蛋白等）女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)毒品（嗎啡,K粉,搖頭丸,冰毒）農(nóng)牧業(yè)畜牧獸醫(yī)站,商檢系統(tǒng),邊檢口岸,農(nóng)牧類院系和研究所傳染病（禽流感,獸瘟疫等）環(huán)境環(huán)保監(jiān)測(cè)部門,研究機(jī)構(gòu)有害物質(zhì)超標(biāo)食品安全食品安全檢測(cè)中心,各監(jiān)管部門農(nóng)獸藥殘留（磺胺類、瘦肉精等）,大腸桿菌,黃曲霉素試紙條組成結(jié)構(gòu)測(cè)試線（T線）控制線（C線）膠體金墊吸水濾紙樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板有4個(gè)組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑵、玻璃纖維膜（膠體金墊）。膜上吸附著干燥的金標(biāo)抗體（流動(dòng)帶）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包
3、被著抗原或抗體條帶和能與標(biāo)記物直接起反應(yīng)的質(zhì)控物條帶（檢測(cè)帶）。⑷、吸水紙。以上各組份首尾互相銜接?；驹硎菍⒁阎奶禺愋钥乖蚩贵w固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測(cè)帶，在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細(xì)作用，樣品泳動(dòng)至玻璃纖維膜，金標(biāo)復(fù)合物溶解，并與樣品進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，形成復(fù)合物，繼續(xù)泳動(dòng)至硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)，帶有金標(biāo)記的復(fù)合物被檢測(cè)區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒(méi)有待測(cè)抗原或抗體，則不發(fā)生結(jié)合，即不顯色。在硝酸纖維素膜檢測(cè)區(qū)附近一般再固定上針對(duì)金標(biāo)結(jié)合物相應(yīng)的抗原或抗體作為質(zhì)控帶，無(wú)論樣品中有無(wú)待測(cè)物，質(zhì)控線都應(yīng)顯示，如無(wú)，則檢測(cè)失敗。整個(gè)過(guò)程一般在15分鐘內(nèi)完成，操作簡(jiǎn)單、
4、快速，且不需任何儀器。免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹膠體金免疫層析法檢測(cè)流腦抗體（間接法）膠體金標(biāo)記的兔抗人IgG，樣品中的流腦抗體與膠體金標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合，沿硝酸纖維素膜移動(dòng)，在包被有流腦抗原結(jié)合，出現(xiàn)紅色反應(yīng)線。免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹（雙抗體夾心）（以HCG檢測(cè)為例）HCG-β亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標(biāo)HCG-α亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。免疫層析法檢測(cè)原理分類介紹（競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)）（以嗎啡檢測(cè)為例）嗎啡偶聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗嗎啡單克隆抗體固定于膜上測(cè)試區(qū)。通過(guò)嗎啡偶聯(lián)物和尿液中的嗎啡競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合金標(biāo)單克隆抗體，最小檢出量300ng/ml。 結(jié)果判定： 陽(yáng)性（+）
5、：?jiǎn)岱?00ng/ml以上，質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，測(cè)試區(qū)內(nèi)不出現(xiàn)紫紅色條帶。嗎啡濃度高于300ng/ml時(shí)，膠體金抗體與嗎啡全部結(jié)合，從而不與嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合而不出現(xiàn)紫紅色條帶。陰性（-）：?jiǎn)岱仍?00ng/ml以下。出現(xiàn)兩條紫紅色條帶，一條在測(cè)試區(qū)內(nèi)，另一條在質(zhì)控區(qū)內(nèi)。嗎啡濃度低于300ng/ml時(shí)，膠體金抗體不能與嗎啡全部結(jié)合。這樣，膠體金抗體在層析過(guò)程中會(huì)被固定在膜上的嗎啡偶聯(lián)物結(jié)合，測(cè)試區(qū)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一條紫紅色條帶。無(wú)效：質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過(guò)程或試劑盒已變質(zhì)損壞。抗體Antibody來(lái)源差異:鼠抗,兔抗和羊抗種類差異:單抗,多抗?jié)舛?濃縮溶解液:不含鹽抗原抗體生物
6、原料抗原Antigen全病毒抗原重組抗原膠體金是由氯金酸（HAuCl4）在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域。容器硅化處理：玻璃表面少量的污染會(huì)干擾膠體金顆粒的生成，一切玻璃容器應(yīng)絕對(duì)清潔，用前經(jīng)過(guò)酸洗、硅化。將玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中１分鐘，室溫干燥后蒸餾水沖洗，再干燥備用。膠體金的制備膠體金的制備枸櫞酸三鈉還原法15nm、18nm
7、～30nm、40nm或50nm膠體金顆粒的制備：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加熱煮沸。根據(jù)需要迅速加入1％枸櫞酸三鈉水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色。這樣制成的膠體金顆粒則分別為15nm、18～20nm、41nm和50nm顏色與顆粒的關(guān)系.最佳標(biāo)記顆粒大小40nm.1％檸檬酸三鈉ml0.300.450.701.001.502.00金溶膠顏色藍(lán)灰紫灰紫
