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《PEGFPLOXPLOX2272 載體的構(gòu)建及牛胎兒轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞篩選程序的優(yōu)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2011年，第19卷，第4期，第711~718頁(yè)JournalofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.4,711~718研究報(bào)告ALetter?pEGFPloxPLox2272載體的構(gòu)建及牛胎兒轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性細(xì)胞篩選程序的優(yōu)化1，222222221*王帥趙學(xué)明朱化彬杜衛(wèi)華郝海生王棟劉巖秦彤王宗禮1甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州730070；2中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193*通訊作者，wangzongli@sina.com摘要綠色熒光
2、蛋白(GFP)是一種分選細(xì)胞的理想標(biāo)記，將綠色熒光蛋白基因定點(diǎn)整合到牛的Y?染色體上是利用GFP分選X和Y?精子的關(guān)鍵。本研究通過(guò)特殊的引物設(shè)計(jì)和高保真酶PCR擴(kuò)增將loxp位點(diǎn)和TM?Lox2272位點(diǎn)引入pEGFPN3?載體中，構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGFPloxpLox2272。采用Lipofectamine(Lip)2000介導(dǎo)線性化質(zhì)粒pEGFPloxpLox2272轉(zhuǎn)染牛胎兒成纖維細(xì)胞，結(jié)果顯示，在質(zhì)粒用量一定的情況下30滋LLip2000?轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效果最理想；轉(zhuǎn)染后的牛胎兒成纖維細(xì)胞用G418?篩選，結(jié)果
3、顯示，濃度為600滋g/mL的G418最適合篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為載體改造提供了一種有效的方法并為牛體細(xì)胞基因打靶陽(yáng)性細(xì)胞系的篩選提供了重要的技術(shù)參考。關(guān)鍵詞綠色熒光蛋白，陽(yáng)性細(xì)胞篩選，基因打靶，載體構(gòu)建ConstructionofaVectorpEGFPloxpLox2272andOptimizationofProcedure?forSelectingTransgenicBovineFetalFibroblasts?1,22222222WangShuai?ZhaoXueming?ZhuHuabin?DuW
4、eihuaHaoHaisheng?WangDong?LiuYan?QinTong?1*WangZongli?1CollegeofAnimalScienceandTechnology,GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,China?2InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China*Correspondingauthor,wangzongli@sina.co
5、mDOI:10.3969/j.issn.16747968.2011.04.017AbstractGreenfluorescentprotein(GFP)isanidealmarkerforcellsorting.Integratinggreenfluorescent?protein(GFP)intobovineYchromosomeisthekeyforsortingXandYspermbyGFP.Inthisstudy,oneloxpsiteandoneLox2272sitewereinsertedintothe
6、vectorpEGPPN3throughspecialdesignedprimersamplifiedby?highfidelityenzymeandthevectorpEGFPloxpLox2272wasconstructed.ThebovinefetalfibroblastswereTM?transfectedwithlinearizedpEGFPloxpLox2272byLipofectamine?(Lip)2000.Theresultsrevealedthatthebesttransfectedeffect
7、wasmediaedby3滋LLip2000andthebestconcentrationofG418forscreeningtransgeniccellcloneswas600滋g/mL.Thisstudyprovidsausefulmethodforconstructingvectorsandimportantreferenceforscreeningbovinegenetargetedcellclones.KeywordsGreenfluorescentprotein,Selectingtransgenicc
8、lonecells,Genetargeting,Vectorconstruction?提高奶牛后代中母犢的比率是一項(xiàng)對(duì)奶業(yè)生產(chǎn)于精液中X?精子和Y?精子之間缺少易于分選的標(biāo)具有重要現(xiàn)實(shí)意義的工作，目前最有效的性別控制記，性控精液的分離速度很慢而且生產(chǎn)成本高昂，在技術(shù)是利用性控精液對(duì)母牛進(jìn)行人工受精，但是由奶業(yè)生產(chǎn)中未得到廣泛應(yīng)用(Johnson,1995?D
