HPLC常見(jiàn)故障及排除

《HPLC常見(jiàn)故障及排除》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、1.色譜柱跑干了，處理方法：將貯液瓶裝入重蒸水，首先按purge鍵，將柱前氣柱排出，若無(wú)法排出，可將色譜柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前氣體排空后，連接色譜柱，用水高低流速交替沖洗色譜柱，直至柱壓穩(wěn)定為止。2.基線不穩(wěn)，有靜電，處理方法：檢查接地是否良好。3.峰面積變化非常大，處理方法：檢查是否進(jìn)樣閥堵塞。4.基線突然提高，變粗，處理方法：檢查樣品池能量，若低于正常值，說(shuō)明檢測(cè)器污染。5.柱壓變動(dòng)范圍較大，處理方法：多為進(jìn)氣泡。高低流速交替沖洗。6.柱效或峰形突然變差，處理方法：更換預(yù)柱。1.塔板數(shù)低：色譜柱選擇不對(duì)，二

2、次保留、峰形不好的影響2.色譜柱易變性：色說(shuō)柱選擇不對(duì)，二次保留的影響3.色譜柱壽命短：色譜柱選擇不對(duì)，樣品需預(yù)處理（PH<3或PH>7）4.保留值變化：色譜柱平衡不夠，流動(dòng)相比例改變5.出現(xiàn)新的干擾峰：初始分離不夠或初始樣品無(wú)代表性 選擇波長(zhǎng)要從以下幾個(gè)方面考慮：1.檢測(cè)波長(zhǎng)要大于溶劑截止波長(zhǎng)。如果所選擇的波長(zhǎng)下溶劑有很強(qiáng)的吸收當(dāng)然是不合適的。溶劑有強(qiáng)吸收后，基線抬高，減小檢測(cè)的線性范圍而且會(huì)加大基線噪聲，對(duì)溶質(zhì)的檢測(cè)靈敏度下降。2.對(duì)各組分都要有適當(dāng)?shù)奈?。一般是不可能做到的。所以只要選擇一個(gè)對(duì)大多數(shù)組分都有較大吸

3、收的波長(zhǎng)就可以了。3.外標(biāo)法定量時(shí)，要選擇被測(cè)組份最大吸收波長(zhǎng)。254nm對(duì)常見(jiàn)的共軛結(jié)構(gòu)和羰基官能團(tuán)都有吸收。對(duì)飽和基團(tuán)也有弱的吸收。而對(duì)于常見(jiàn)的乙腈、甲醇的透過(guò)率很高。是在不知道用什么波長(zhǎng)時(shí)最理想的試驗(yàn)波長(zhǎng)。1、開(kāi)泵后壓力即升高至最高限度，經(jīng)過(guò)對(duì)色譜柱前，色譜柱，色譜柱后的分段測(cè)試，確定為檢測(cè)池堵塞。2、換檢測(cè)波長(zhǎng)后，色譜峰面積比以前做的小很多，懷疑進(jìn)樣環(huán)或管路漏夜，經(jīng)檢查，排除，最后確定為，檢測(cè)波長(zhǎng)的顯示值和實(shí)際值不符。1.渦流擴(kuò)散（Eddydiffusion）流動(dòng)相碰到較大的固體顆粒，就像流水碰到石頭一樣產(chǎn)生渦

4、流。如果柱裝填得不均勻，有的部分松散或有細(xì)溝，則流動(dòng)相的速度就快；有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流就慢，多條流路有快有慢，就使區(qū)帶變寬。因此，固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，這樣渦流擴(kuò)散小，柱效率高。2.分子擴(kuò)散（Moleculardiffusion）分子擴(kuò)散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運(yùn)動(dòng)，也稱(chēng)縱向分子擴(kuò)散。要減少分子擴(kuò)散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時(shí)在操作時(shí)，如果流速太慢，被分離物質(zhì)停留時(shí)間長(zhǎng)，則擴(kuò)散嚴(yán)重。3.質(zhì)量轉(zhuǎn)移（Masstransfer）被分離物質(zhì)要在流動(dòng)相與固定相中平衡，這樣才能形成

5、較窄的區(qū)帶。在液相色譜中，溶質(zhì)分子要在兩個(gè)液相之間進(jìn)行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時(shí)間。當(dāng)流速快時(shí)，轉(zhuǎn)移速度慢，來(lái)不及達(dá)到平衡動(dòng)相就向前移，這各物質(zhì)的非平衡移動(dòng)，使區(qū)帶變寬。4.動(dòng)相流速當(dāng)流速太低時(shí)，分子擴(kuò)散嚴(yán)重，特別是在氣相色譜中尤為突出。如將理論塔板高度對(duì)流速作圖，理論塔板高度隨流速增加而急速下降，當(dāng)達(dá)到最低值時(shí)，流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用，理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中，流速稍快影響不大，但在凝膠過(guò)濾色譜中，因?yàn)槲镔|(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部，所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大，流速咖大會(huì)降低柱效率。5.固定相顆粒

6、大小定相顆粒越小柱效率越高，對(duì)流動(dòng)相流動(dòng)的阻力越大，需要加大壓力才能使它流動(dòng)hope78:進(jìn)樣閥可能發(fā)生的問(wèn)題問(wèn)題可原因解決方法A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈1、轉(zhuǎn)子密封損壞更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)重新安裝2、定量環(huán)阻塞清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染清洗或更換進(jìn)樣器4、管路阻塞清洗或更換管路C、自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)1、無(wú)壓力（或電源）提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?、轉(zhuǎn)子太緊調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)重新安裝D、自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題1、阻塞清洗或更換阻塞部件2、

7、機(jī)械故障見(jiàn)隨機(jī)維修手冊(cè)3、控制器故障維修或更換控制器A．HPLC柱壓過(guò)高：1.拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；2.把色譜柱從儀器上取下來(lái)，如果壓力仍然不降，則是管路堵塞，須清洗，如果壓力下降了，將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接再儀器上，用10倍量柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，如果柱壓仍不降，再檢查；3.更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明溶劑獲樣品中含有固體顆粒，若柱壓還高，可在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器。B．基線不穩(wěn)，上下波動(dòng)或漂移：1．流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘；2．單向

8、閥堵塞，取下超聲去除堵塞物；3．泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)，更換泵密封；4．系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)，確定漏液位置并維修；5．流通池內(nèi)有贓物或者雜質(zhì)，清洗雜物；6．柱后產(chǎn)生氣泡，流通池出液口加負(fù)壓調(diào)節(jié)器；7．檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；8．柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)。用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積