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1、HPLC?故障及排除方法診狀??可能的原因及解決方法??(一)保留時(shí)間變化1.柱溫變化??????????????????????????????????柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡??????????????????至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3.緩沖液容量不夠????????????????????????????用>25mmol/L的緩沖液4.柱污染????????????????????????????????????每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化?????????????????????????????
2、?穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相6.柱快達(dá)到壽命??????????????????????????????采用保護(hù)柱(二)保留時(shí)間縮短1.流速增加??????????????????????????????????檢查泵,重新設(shè)定流速2.樣品超載????????????????????????????????????降低樣品量3.鍵合相流失????????????????????????????????流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向4.流動(dòng)相組成變化????????????????????????????防止流動(dòng)
3、相蒸發(fā)或沉淀5.溫度增加??????????????????????????????????柱恒溫(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)1.流速下降??????????????????????????????????管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化????????????????用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失??????????????????????????????同前(二)34.流動(dòng)相組成變化????????????????????????????同前(二)45.溫度降低?????
4、???????????????????????????同前(二)5(四)出現(xiàn)肩峰或分叉1.樣品體積過(guò)大??????????????????????用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)??????????????????????采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道??????????????更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效????????????????更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品5.進(jìn)樣器損壞????????????????????????更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子(五)
5、鬼峰1.進(jìn)樣閥殘余峰??????????????????????每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗2.樣品中未知物??????????????????????處理樣品3.柱未平衡????????????????????重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)????????????????每天新配,用抗氧化劑5.水污染(反相)????????????????????????????????通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水(六)線噪聲1.氣泡(尖銳峰)???
6、?????????????????????????????流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓2.污染(隨機(jī)噪聲)??????????????????????????????清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲??????????????????更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲)??????????????????????????采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)5.檢測(cè)器中有氣泡????????????????????流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓(七)峰拖尾1.柱超載????????????????????????降
7、低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相2.峰干擾??????????????????????????清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相3.硅羥基作用??????????????????????加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品4.死體積或柱外體積過(guò)大連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管5.柱效下降????????????????????????用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱(八)峰展寬1.進(jìn)樣體積過(guò)大????????????????????????同(四)12.在進(jìn)
8、樣閥中造成峰擴(kuò)展????????????????進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢????????????????設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大??????????????????設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動(dòng)相粘度過(guò)高??????????????????????增加柱溫,采用低粘
