資源描述：
《MS培養(yǎng)基的作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、MS培養(yǎng)基的作用植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基。MS培養(yǎng)基的配制步驟 這樣每次使用時(shí)，取其總量的1/20(50mL)或1/200(5mL)，加水稀釋，制成培養(yǎng)液。現(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時(shí)使用。 大量元素(母液Ⅰ)mg/L NH4NO333000 KNO338000 CaCl2·2H2O8800 MgSO4·7H2O7400 KH2PO43400 微量元素(母液Ⅱ) KI166 H3BO31240 MnSO4·4H2O4460 ZnSO4·7H2O1720 Na2MoO4·2H2O50
2、CuSO4·5H2O5 CoCl2·6H2O5 鐵鹽(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O5560 Na2-EDTA·2H2O7460 有機(jī)成分(母液Ⅳ)ⅣA 肌醇20000 ?、鬊煙酸100 鹽酸吡哆醇(維生素B6)100 鹽酸硫胺素(維生素B1)20 甘氨酸400 以上各種營(yíng)養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外，其余的均為200倍濃縮液?！ ∩鲜鰩追N母液都要單獨(dú)配成1L的貯備液。其中， 母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1L?！ ∧敢孩蟮?/p>
3、配制方法是：將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450mL蒸餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5?5，最后定容到1L，保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號(hào)、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中?！ S培養(yǎng)基中還需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6-芐基嘌呤(6-BA)等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液(0?1mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10mg，將2，4-D和NAA用少量(1mL)無(wú)水乙醇預(yù)溶
4、，將6-BA用少量(1mL)的物質(zhì)的量濃度為0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過(guò)程需要水浴加熱，最后分別定容至100mL，即得質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的母液。配制培養(yǎng)液用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5mL。再取2，4-D5mL、NAA1mL，與各種母液一起放入燒杯中。MS培養(yǎng)基配制培養(yǎng)液時(shí)的注意事項(xiàng) 配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)注意： ①在使用提前配制的母液時(shí)，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動(dòng)盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進(jìn)行配制； ?、谟昧客不?/p>
5、移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤(rùn)洗2次； ?、哿咳∧敢簳r(shí)，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃掉1種，以免出錯(cuò)。溶化瓊脂用粗天平分別稱取瓊脂9g、蔗糖30g，放入1000mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1000mL，攪拌均勻。需要注意的是，在加熱瓊脂，制備培養(yǎng)基的過(guò)程中，操作者千萬(wàn)不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如果沒(méi)有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒
6、杯底的外表面不能沾水，否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào)pH用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙(5.4～7.0)測(cè)培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH為5.8為止(培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在5.8)。培養(yǎng)基的分裝溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。分裝時(shí)，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶(50mL或100mL)中。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/5～1/4。每1000mL培養(yǎng)基，可分裝25～30瓶。培養(yǎng)基分裝完畢后，
7、應(yīng)及時(shí)封蓋瓶口。用2塊硫酸紙(每塊大小約為9cm×9cm)中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎。最后在錐形瓶外壁貼上標(biāo)簽。高壓滅菌培養(yǎng)基的高壓滅菌步驟 高壓滅菌培養(yǎng)基的高壓滅菌包括以下幾個(gè)步驟?！ 〉谝?，碼放錐形瓶。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。如果沒(méi)有金屬小筐，可以在兩層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開?！ 〉诙胖闷渌枰獪缇奈锲?。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)，如裝有蒸餾水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶、燒杯、廣口瓶(以上物品都要用牛皮紙封口)，用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿、剪刀、解剖刀、鑷子、濾紙、鉛筆等。
8、 第三，滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在98kPa、121.3℃下，滅菌20min。滅菌后取出
