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《乳酸菌的分離純化___畢業(yè)設(shè)計》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、LUOYANGNORMALUNIVERSITY2015屆畢業(yè)論文乳酸菌的分離純化及抑菌實驗院（系）名稱生命科學學院專業(yè)名稱生物技術(shù)學生姓名勾倩倩學號111344045指導(dǎo)老師易力副教授完成時間2015年5月7日乳酸菌的分離純化及抑菌實驗勾倩倩生命科學學院生物技術(shù)專業(yè)學號：111344045指導(dǎo)教師：易立副教授摘要：本文對乳酸菌的分離純化，革蘭氏染色以及抑菌實驗進行闡述，從市售酸菜中分離純化得到乳酸菌，革蘭氏染色進行鑒定，最后進行金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌實驗！實驗主要是分離純化，革蘭氏染色，最后用抑菌實驗比較單菌株的抑菌能力。因為什么，做了什么實驗，得出什么結(jié)論關(guān)
2、鍵詞：乳酸菌：分離純化；革蘭氏染色；抑菌乳酸菌(LAB，Lacticacidbacteria)是指能使碳水化合物(主要為葡萄糖)發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸的細菌的通稱，這類細菌生長在礦物質(zhì)和有機營養(yǎng)豐富的微酸性環(huán)境中[1,2]。在自然界中比較常見，用途廣泛，它可以改善食物的風味，并延長食品的貨架期，作為保健食品和藥品，可以改善和提高人的健康水平，延年益壽，還可以作為微生物學和微生態(tài)學領(lǐng)域研究的模式生物[3]。酸菜是世界性大眾化蔬菜腌制品,在我國歷史悠久[4]，其自然發(fā)酵的主要菌群是乳酸菌[5]。人體在攝人發(fā)酵酸菜時，也同時攝入了大量的乳酸菌體及其代謝產(chǎn)物[6]。乳酸菌是酸菜發(fā)酵
3、過程中的有益菌，在發(fā)酵速度以及發(fā)酵產(chǎn)品品質(zhì)等方面都起到至關(guān)重要的作用。因此在微生物學和食品科學的研究中，對酸菜中乳酸菌進行鑒定是必要的[7前言內(nèi)容太少，乳酸菌的好處多陳述一些]。本實驗從酸菜中分離純化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6），進行革蘭氏染色，為紫色桿狀，最后進行抑菌實驗，比較6株乳酸菌的抑菌能力。1材料與儀器1.1菌種乳酸菌1.2樣品來源市售新鮮酸菜131.3培養(yǎng)基（1）乳酸菌分離培養(yǎng)基（固體MRS培養(yǎng)基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀1g，檸檬酸銨1g，乙酸鈉2.5g，硫酸鎂0.29g，硫酸錳0.125g，吐溫80
4、0.5mL，瓊脂8.5g，蒸餾水500mL，pH7.0（2）乳酸菌純化培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基+1%的碳酸鈣溶液（碳酸鈣1g，蒸餾水100mL）（3）乳酸菌富集培養(yǎng)培養(yǎng)基（液體MRS培養(yǎng)基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀1g，檸檬酸銨1g，乙酸鈉2.5g，硫酸鎂0.29g，硫酸錳0.125g，吐溫800.5mL，蒸餾水500mL，pH7.0（4）抑菌實驗培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl2.5g，瓊脂粉7.5g，水500mL，pH7.21.4儀器及用具恒溫培養(yǎng)箱，高壓蒸汽滅菌鍋，超凈工作臺，培養(yǎng)皿，錐形瓶
5、，移液槍，涂布棒，接種針2方法與過程方法里的圖片是很常規(guī)的，不用要2.1酸菜中菌種的分離培養(yǎng)（平板涂布法）吸取湯汁0.1ml，加入9ml無菌水中進行100倍稀釋，依次做5個梯度，每個梯度分別取0.2ml涂布于滅好菌MRS培養(yǎng)基中，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，然后用封口膜封住培養(yǎng)皿，平放于試驗臺上20min，然后倒置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。2.2酸菜中菌種的純化培養(yǎng)（平板劃線法）48h無菌條件下，從培養(yǎng)基中挑選不同的菌落，放入1.5ml無菌水中稀釋，用接種環(huán)挑取菌液，用平板劃線法接入含有1%碳酸鈣的MRS培養(yǎng)基，用封口膜密封培養(yǎng)皿，倒13置放在37℃
6、恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。2.3革蘭氏染色在潔凈的載玻片上加蒸餾水一滴，然后用接種環(huán)分別挑選取少量培養(yǎng)基透明圈中的單菌落與水滴混勻，涂開，而后將此玻片在酒精燈火焰上通過3—4次，使細菌固定在載玻片上。然后，加草酸銨結(jié)晶紫液，染1—2min，水洗并除盡水滴。然后在涂片上滴加碘液，染1—2min除盡水滴。而后在涂片上，滴加復(fù)紅乙醇溶液，維持1min，水洗，用吸水紙輕輕吸干，最后進行油鏡鏡檢。2.4抑菌實驗13首先用打孔器制作藥敏片并高溫滅菌。然后把培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基里的乳酸菌倒在滅過菌的培養(yǎng)皿上，做好的藥敏片放在里邊浸泡20分鐘左右，拿出來瀝干（藥敏片仍然是濕的，但是沒有水
7、珠）。其次，倒平板，分別涂布金黃色葡萄球菌和大腸桿菌。最后，每個培養(yǎng)皿放4個藥敏片。用封口膜密封培養(yǎng)皿，倒置放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。2.5保種甘油和乳酸菌菌液1:1放在凍存管中，放在冰箱—20℃保存。3實驗結(jié)果3.1分離培養(yǎng)結(jié)果乳酸菌菌落大約1-3mm，圓形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黃色。3.2純化培養(yǎng)結(jié)果分離純化放在一起，是一個統(tǒng)一的過程，需要看到的是單菌落照片，這幾張照片沒任何體現(xiàn)。13133.3革蘭氏染色結(jié)果13紫色棒狀乳酸菌，證乳酸菌為革蘭氏陽性菌3.4抑菌實驗結(jié)果13分離得到的6株乳酸菌13金黃色葡萄球菌抑菌效果13大
