甾體皂苷類成分提取分離方法

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1、甾體皂苷提取分離方法　　甾體皂苷(steroidalsaponins)是天然產(chǎn)物中一類重要的化學(xué)成分,大多都具有一定的生理活性,在天然產(chǎn)物化學(xué)研究中日趨活躍。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),超過90個(gè)科的植物含有甾體皂苷,尤以單子葉植物的百合科、石蒜科、薯蕷科和龍舌蘭科等植物報(bào)道最多。由于含甾體皂苷成分的動(dòng)植物藥有相當(dāng)?shù)寞熜?。所?人們?cè)趹?yīng)用和研究方面越來越廣泛。例如:Dracaenadraco被用于抗腹瀉和止血[1],蒺藜用于治療眼病、浮腫、腹脹、高血壓、皮癬和氣管炎[2],Chlorophytummalayense對(duì)腫瘤有潛在的細(xì)胞毒活性[3],Agaveamericana有通便和利尿

2、的作用[4],Solanumnigrum在中國和日本用于對(duì)各種癌癥的治療[5],白首烏民間用于滋補(bǔ)藥膳,是一種有前途的抗衰老藥物[6],虎眼萬年青民間用于抗腫瘤[7],西陵知母用于治療煩熱消渴,骨蒸勞熱,肺熱咳嗽等[8]。本文就甾體皂苷的提取分離方法做一簡(jiǎn)單綜述。甾體皂苷類化合物由于連有糖殘基,一般有較強(qiáng)的極性,易溶于水、甲醇、乙醇等極性溶劑,不易溶于氯仿、乙醚等非極性溶劑。甾體皂苷不易形成結(jié)晶（苷元例外）,且有時(shí)結(jié)構(gòu)相似，給分離帶來一定困難。甾體皂苷提取分離基本步驟為粗提、除雜、分離。1、提取目前,實(shí)驗(yàn)室最常用不同濃度的工業(yè)乙醇或甲醇提取。也有用水作為溶劑的,如:Jia

3、nyingzhang等用80-85℃的水從Anemarrhenaasphodeloides的根狀莖中提取到六種甾體皂苷[9]。也可以先用氯仿、石油醚等強(qiáng)親脂性溶劑處理中草藥原料,然后用乙醇為溶劑加熱提取,冷卻提取液,多數(shù)甾體皂苷由于難溶于冷乙醇而作為沉淀析出[10]。2、除雜方法無論是用水還是醇作為溶劑提取所得到的皂苷,多還包含許多雜質(zhì),如無機(jī)鹽、糖類、鞣質(zhì)、色素等,尚需要進(jìn)一步精制。2.1液液萃取法這是一種最普遍的皂苷除雜方法,利用皂苷一般極性較大,易溶于水而其中的一些雜質(zhì)極性較小易溶于非極性溶劑的性質(zhì)來去除一些脂溶性的雜質(zhì)。一般的操作是將醇提取液減壓濃縮得到的浸膏,懸

4、浮于水中,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行梯度萃取,甾體皂苷一般存在于正丁醇層,減壓回收正丁醇后得總皂苷。2.2沉淀法在含甾體皂苷的甲醇或乙醇液中倒入大量的乙醚或丙酮,可將皂苷類化合物沉淀出來。進(jìn)一步利用過濾或離心的方法即得總皂苷,反復(fù)利用這種沉淀法可達(dá)到初步純化的效果。也可利用皂苷會(huì)與膽甾醇形成沉淀的特性進(jìn)行初步純化。皂苷溶于乙醇,加膽甾醇的乙醇溶液沉淀,過濾,沉淀干燥后置于索(soxhlex)提取器中用苯回流,不溶物為皂苷,苯液濃縮后可回收膽甾醇。2.3吉拉德(Girard)腙法吉拉德試劑T或P在一定條件下,可與含羰基的甾體皂苷元生成腙,而與不含羰基的甾體皂苷元分離

5、。通常先將粗甾體皂苷元溶于少量乙醇,再加入吉拉德試劑T或P,并加乙酸使達(dá)10%的含量,水浴加熱或室溫下放置后,加水稀釋,加入乙醚萃取除去不含羰基的皂苷元,在水相中加入鹽酸使羰基皂苷元形成的吉拉德腙水解,即可得原羰基皂苷元。2.4大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂多為苯乙烯或2-甲基丙烯酸酯型,理化性質(zhì)穩(wěn)定,不溶于水、酸、堿及常用有機(jī)溶劑。根據(jù)其結(jié)構(gòu)單元不同分為各種型號(hào),常用的如:D101型、DA-201型、DiaionHP-20型、AB-8型等[11]。舒孝順等用大孔樹脂分離菝葜總皂苷,從HPD100、HPD300、HPD600、及D101四種大孔樹脂中篩選出HPD100非極性樹

6、脂,研究結(jié)果表明該樹脂對(duì)于本體系中的總皂苷具有吸附快解吸較易、流體流動(dòng)性能好、操作簡(jiǎn)單和周期短等優(yōu)勢(shì)[12]。在用大孔樹脂獲得較為精致的總皂苷后,為進(jìn)一步獲得皂苷單體,一般還需采用其他的色譜方法。3、分離方法甾體皂苷親水性較強(qiáng),有些皂苷極性非常接近,以上述方法分離純化,難以獲得單體化合物,所以皂苷經(jīng)過一定的純化后,常采用不同的色譜法分離甚至反復(fù)經(jīng)過色譜法分離,才能獲得單體成分?？傇碥盏姆蛛x主要是采用柱色譜技術(shù)。填料以硅膠為主,另外有葡聚糖凝膠(如SephadexLH-20),烷基鍵合硅膠(ODS)等。SephadexLH-20適合于分子量相差大的化合物的分離,ODS對(duì)極性

7、大的化合物分離效果較好。在柱分離模式上,有常壓色譜、中壓色譜(MPLC)和高壓色譜(HPLC)。HPLC法用于分離高極性、大分子量及結(jié)構(gòu)相似的甾體皂苷有著突出的優(yōu)點(diǎn)。3.1制備薄層層析法方法與薄層層析相同,只是增加薄層吸附劑厚度來增加其載藥量,與柱層析相比,分離效果更好,能用來制備較純的皂苷,但制備量最大仍只能達(dá)到幾百毫克。3.2硅膠柱層析法硅膠柱層析是一種傳統(tǒng)的分離方法,目前在甾體皂苷的分離工作中仍被廣泛應(yīng)用。如:陳夢(mèng)菁通過多次硅膠柱層析,從四川蜘蛛抱蛋中分離到了三種甾體皂苷[13]。林厚文等運(yùn)用反復(fù)硅膠柱層析從中藥玉竹中分