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1、第七章微生物的生長繁殖及其控制本章主要內(nèi)容微生物生長研究方法?微生物如何進行生長?影響微生物生長的因素是什么?如何控制微生物的生長?生物個體物質(zhì)有規(guī)律地、不可逆增加,導(dǎo)致個體體積擴大的生物學(xué)過程。生長:生物個體生長到一定階段,通過特定方式產(chǎn)生新的生命個體,即引起生命個體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。繁殖:生長是一個逐步發(fā)生的量變過程,繁殖是一個產(chǎn)生新的生命個體的質(zhì)變過程.在高等生物里這兩個過程可以明顯分開,但在低等特別是在單細胞的生物里,由于細胞小,這兩個過程是緊密聯(lián)系又很難劃分的過程。一個微生物細胞合適的外界條件,吸收營養(yǎng)物質(zhì),進行代謝.如果同化作用的速度超過了異化作
2、用個體的生長原生質(zhì)的總量(重量、體積、大小)不斷增加如果各細胞組分是按恰當?shù)谋壤鲩L時,則達到一定程度后就會發(fā)生繁殖,引起個體數(shù)目增加.群體內(nèi)各個個體的進一步生長群體的生長群體生長=個體生長+個體繁殖個體生長→個體繁殖→群體生長在一定時間和條件下細胞數(shù)量的增加(微生物群體生長)微生物生長:在微生物學(xué)中提到的“生長”,一般均指群體生長,這一點與研究大生物時有所不同。一、微生物純培養(yǎng)方法純培養(yǎng)(pureculture)——微生物學(xué)中把從一個細胞經(jīng)過培養(yǎng)繁殖而得到的后代,稱純培養(yǎng)。第一節(jié)微生物生長的研究方法①平板涂布分離法(SpreadPlate)簡單易行,但易造成機
3、械損傷②平板劃線分離法(StreakPlate)特點:快速、方便。分區(qū)劃線(適用于濃度較大的樣品)連續(xù)劃線(適用于濃度較小的樣品)③稀釋倒平板法(PourPlate)1ml1ml1ml1ml1ml1ml9ml9ml9ml9ml首先將待分離的樣品進行連續(xù)稀釋,目的是得到高度稀釋的效果,使一支試管中分配不到一個微生物.這種方法適合于細胞較大的微生物.④液體稀釋法⑤選擇性培養(yǎng)分離法為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物,可以根據(jù)該微生物的特點,包括營養(yǎng)、生理、生長條件等,采用選擇培養(yǎng)的方法進行分離。利用選擇培養(yǎng)基進行直接分離富集培養(yǎng)⑥單細胞(單孢子)分離法毛細管法:
4、用毛細管提取微生物個體,適合于較大微生物。顯微操作儀:用顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個細胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。小液滴法:將經(jīng)過適當稀釋后的樣品制成小液滴,在顯微鏡下選取只含一個細胞的液滴來進行純培養(yǎng)物的分離。二、微生物的培養(yǎng)方法通常情況下,微生物的培養(yǎng)方法根據(jù)培養(yǎng)過程中對氧的需要與否分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng);根據(jù)所用培養(yǎng)基的物理特性分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)。(一)、好氧培養(yǎng)方法1、固體培養(yǎng)方法2、液體培養(yǎng)方法(二)、厭氧培養(yǎng)方法實驗室中常用厭氧手套箱、Hungate滾管及厭氧罐通常用來測定細菌、酵母菌等單細胞微生物的生長情況或樣品中所含微生物個體的數(shù)量(細菌、孢子、酵母菌
5、)三、生長繁殖測定方法(一)、計數(shù)法1、顯微鏡直接計數(shù)法1)常規(guī)方法:采用細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板,在顯微鏡下對微生物數(shù)量進行直接計數(shù)(計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量).缺點:不能區(qū)分死菌與活菌;不適于對運動細菌的計數(shù);需要相對高的細菌濃度;個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察;2)其它方法:將已知顆粒濃度的樣品(例如血液)與待測細胞細胞濃度的樣品混勻后在顯微鏡下根據(jù)二者之間的比例直接推算待測微生物細胞濃度。比例計數(shù):2、涂布平板計數(shù)法采用培養(yǎng)平板計數(shù)法要求操作熟練,準確,否則難以得到正確的結(jié)果:樣品充分混勻;每支移液管及涂布棒只能接觸一個稀釋度的菌液;同一稀釋度三個
6、以上重復(fù),取平均值;每個平板上的菌落數(shù)目合適,便于準確計數(shù);一個菌落可能是多個細胞一起形成,所以在科研中一般用菌落形成單位(colonyformingunits,CFU)來表示,而不是直接表示為細胞數(shù)。3、倒平板計數(shù)法(PourPlate)1ml1ml1ml1ml1ml1ml9ml9ml9ml9ml4、膜過濾培養(yǎng)法當樣品中菌數(shù)很低時,可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器,然后將將膜轉(zhuǎn)到相應(yīng)的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),對形成的菌落進行統(tǒng)計。(二)、生物量法1、比濁法在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度(opticaldensity,即O.D.)表示菌
7、量。實驗測量時應(yīng)控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi),否則不準確。2、重量法干重法:將微生物菌體或離心得到的細胞沉淀物置100—105℃的烘箱中干燥至水份去除,然后再稱重。濕重法:收集微生物菌體,或?qū)⑽⑸锱囵B(yǎng)液離心,收集細胞沉淀物,然后稱重。通過樣品中蛋白質(zhì)、核酸含量的測定間接推算微生物群體的生物量;測定多細胞及絲狀真菌生長情況的有效方法(三)、生理指標法微生物的生理指標,如呼吸強度,耗氧量、酶活性、生物熱等與其群體的規(guī)模成正相關(guān)。樣品中微生物數(shù)量多或生長旺盛,這些指標愈明顯,因此可以借助特定的儀器如瓦勃氏呼吸儀、微量量熱計等設(shè)備來測定相應(yīng)的指標。常用于對微
8、生物的快速鑒定與檢測四、