2細(xì)菌的分布、消毒和滅菌

2細(xì)菌的分布、消毒和滅菌

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1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告課程名稱:醫(yī)學(xué)微生物學(xué)指導(dǎo)老師:________________成績:__________________實(shí)驗(yàn)名稱:細(xì)菌的分布、消毒和滅菌實(shí)驗(yàn)類型:_______________同組學(xué)生姓名:__________裝訂線一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解細(xì)菌廣泛分布于自然界及正常人體,樹立“有菌觀念”,從而認(rèn)識無菌操作對于微生物學(xué)及醫(yī)學(xué)實(shí)踐的重要性。2.了解正常人體中寄居著種類繁多的細(xì)菌,正常情況下不引起人類疾病,稱為正常菌群。熟悉外界因素對細(xì)菌的影響,掌握常用的消毒和滅菌方法3.觀察細(xì)菌鞭毛的變異4.熟悉生物因素對細(xì)菌

2、的作用二、實(shí)驗(yàn)材料普通瓊脂平板培養(yǎng)基、大腸桿菌肉湯培養(yǎng)液、枯草桿菌肉湯培養(yǎng)液、無菌毛細(xì)吸管、肉湯培養(yǎng)基管、電爐、鍋?zhàn)?、高壓滅菌器、接種環(huán)、酒精燈、紫外線燈、大腸桿菌培養(yǎng)物三、操作方法1.細(xì)菌的分布1)空氣中的細(xì)菌(8人一組)取普通瓊脂平板一個(gè),打開蓋暴露于空氣中約15-30分鐘,然后蓋好,放37℃溫箱孵育24小時(shí)后觀察結(jié)果,計(jì)算有多少個(gè)菌落。2)手指皮膚上的細(xì)菌(8人一組)用手指直接涂于普通瓊指平板上,放37℃溫箱孵育,24小時(shí)后觀察結(jié)果,記錄有多少種不同特征的菌落。2.消毒和滅菌1)煮沸與高壓滅菌法(2人一組)

3、●菌液:大腸桿菌/枯草桿菌●甲組:煮沸(100℃,5min)●乙組:高壓滅菌法(121℃,20min)●丙組:不作任何加熱處理2)紫外線滅菌(8人一組)圖1圖1①以滅菌接種環(huán)挑取大腸埃希菌培養(yǎng)物,于瓊脂平板上作來回密集劃線接種。②半啟皿蓋(將皿蓋遮住涂面的1/2),置于紫外線燈下lm以內(nèi)接受照射30分鐘。③蓋上皿蓋,于37℃培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。3.抗生素的抗菌試驗(yàn)圖2●菌株:金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌1號、2號4.示教1)化學(xué)消毒劑對細(xì)菌的影響●觀察抑菌圈2)細(xì)菌鞭毛的變異0.1%石炭酸圖2遷徙生

4、長(H)變形桿菌點(diǎn)狀生長、單個(gè)菌落(O)一、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.細(xì)菌分布的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表1細(xì)菌分布的實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢查材料空氣手指細(xì)菌生長情況菌落個(gè)數(shù)平板培養(yǎng)基表面或多或少有菌落生長。培養(yǎng)基表面涂抹處有菌落生長。2.消毒和滅菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表2煮沸和高壓滅菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果細(xì)菌名稱甲組100℃5分鐘乙組121℃20分鐘丙組未加熱(對照)枯草芽胞桿菌混濁澄清混濁大腸埃希菌澄清澄清混濁3.紫外線滅菌結(jié)果平板上用皿蓋遮蓋部分的瓊脂表面有灰白色菌苔生長,而未遮蓋暴露于紫外線部分無菌生長。說明紫外線具有滅菌作用,但穿透力弱。4.化學(xué)消毒劑對細(xì)菌的影響實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果表3化學(xué)消毒劑對細(xì)菌的影響化學(xué)消毒劑大腸埃希菌金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑(cm)敏感度抑菌圈直徑(cm)敏感度1%龍膽紫2.7﹢﹢﹢1.6﹢﹢2%碘酒3.0﹢﹢﹢0.7﹢2%紅汞1.2﹢﹢1.4﹢﹢1:1000新潔爾滅1.0﹢﹢2.1﹢﹢﹢5.細(xì)菌鞭毛的變異0.1%石炭酸培養(yǎng)基上變形桿菌只在點(diǎn)種處生長,而在普通培養(yǎng)基上變形桿菌呈遷徙性生長。二、結(jié)果分析1.細(xì)菌廣泛分布于自然界及正常人體。2.高溫對細(xì)菌有明顯的致死作用,主要機(jī)制是凝固菌體蛋白質(zhì),也可能與細(xì)菌DNA單螺旋斷裂、細(xì)菌細(xì)胞膜功能受損及菌體內(nèi)電解質(zhì)濃縮有

6、關(guān)。高壓蒸氣滅菌,因增加壓力而提高沸點(diǎn),滅菌效果最佳。有芽胞的細(xì)菌由于對熱的抵抗力比無芽胞細(xì)菌強(qiáng),所以只有采用高壓蒸氣滅菌法才能將芽胞徹底殺滅。本實(shí)驗(yàn)中大腸桿菌無芽孢結(jié)構(gòu),沸水即可殺滅,而枯草芽孢桿菌具芽孢結(jié)構(gòu),普通沸水殺不死芽孢,需要使用高壓蒸汽滅菌。3.波長240nm~280nm的紫外線,因與DNA吸收光譜一致,而具有明顯的殺菌作用。其機(jī)制是使細(xì)菌DNA鏈中兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體,從而破壞DNA構(gòu)型,干擾其正常復(fù)制,導(dǎo)致細(xì)菌死亡。本實(shí)驗(yàn)中暴露于紫外線的培養(yǎng)基中無菌生長被殺滅,而未暴露的菌可以生長實(shí)驗(yàn)支持

7、理論。4.從表3可知不同化學(xué)劑對同種細(xì)菌產(chǎn)生的抑制作用不同,不同菌種對同種化學(xué)消毒劑的反應(yīng)也存在差異。5.普通培養(yǎng)基中的菌落呈現(xiàn)擴(kuò)布式,可知菌體具有鞭毛,能夠移動,另外對比發(fā)現(xiàn)0.1%石炭酸能夠抑制該菌的生長。一、討論心得1.在正常人身體的皮膚、毛發(fā)以及與外界相通的器官中都存在著—定數(shù)量的微生物。在正常情況下,它們對人體是有益而無害的,稱為正常菌群。機(jī)體正常寄居的微生物是互相依存,互相制約的,保持著動態(tài)平衡,與人體之間表現(xiàn)為互生關(guān)系。2.高壓蒸汽滅菌在實(shí)驗(yàn)室是最常用、最有效的滅菌方法。3.利用紫外線殺菌限于物體表

8、面的殺菌,比較有效,但對內(nèi)部效果不佳。4.實(shí)驗(yàn)中新潔爾滅屬季銨鹽類消毒劑,它是一種陽離子表面活性劑,在消毒學(xué)分類上屬低效消毒劑。其殺菌作用機(jī)制主要有:①改變細(xì)胞的滲透性,使細(xì)菌破裂;②使蛋白質(zhì)變性;③抑制細(xì)菌體內(nèi)某些酶,使之失去活性;④因其有良好的表面活性,可高濃度聚集于菌體表面,影響細(xì)胞的新陳代謝。5.一個(gè)理想的化學(xué)消毒劑,應(yīng)具備以下幾個(gè)特點(diǎn):(1)殺菌譜廣;(2)使用

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