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1、實驗三細菌的分布與消毒滅菌【目的】①了解細菌廣泛分布于自然界及正常人體，樹立“有菌觀念”，從而認識無菌操作對于微生物學及醫(yī)學實踐的重要性。②了解正常人體中寄居著種類繁多的細菌，正常情況下不引起人類疾病，稱為正常菌群。③熟悉外界因素對細菌的影響，學習常用的消毒滅菌方法。④了解不同細菌對外界因素具有不同的抵抗力。一、細菌的分布檢查（一）空氣中的細菌檢查【材料】普通瓊脂平板培養(yǎng)基?！痉椒ā竣偃∑胀ō傊桨逡恢婚_啟皿蓋，培養(yǎng)基面向上放于實驗桌上，暴露5～30min后蓋好。②置37℃培養(yǎng)18～24小時后觀察結果?！窘Y果】（填表10-1）平板培養(yǎng)基表面或多
2、或少有菌落生長。（二）地面水中的細菌檢查【材料】地面水(河水、井水或池水)、高層瓊脂培養(yǎng)基、1ml無菌吸管、滅菌培養(yǎng)皿?！痉椒ā竣僖詿o菌吸管吸取1ml地面水，加入滅菌平皿中。②將已溶化且冷至45℃左右的高層瓊脂傾注人上述平皿中，加蓋后輕輕搖動，使水與瓊脂充分混勻，靜凝。③37℃24小時后取出觀察，計數菌落?！窘Y果】（填表10-1）（三）衣服、票證、頭發(fā)、手指皮膚上的細菌檢查【材料】普通瓊脂平板培養(yǎng)基?！痉椒ā咳∑胀ㄆ桨逡粋€，用蠟筆在平板背面玻璃上劃成四等分，并貼上標簽(圖10-1)。然后以無菌操作法，用衣袖角、票證、頭發(fā)及手指或指甲內污物，在平
3、板培養(yǎng)基表面相應部位輕輕涂抹，置37℃培養(yǎng)24小時，觀察并記錄結果?！窘Y果】填表培養(yǎng)基表面涂抹處有菌落生長。衣服、票證、頭發(fā)、手指皮膚上的細菌檢查（四）正常人體咽喉部的細菌檢查【材料】血液瓊脂平板培養(yǎng)基、滅菌棉拭、接種環(huán)、酒精燈?！痉椒ā咳缇奘靡恢?，在被檢查者咽喉部輕輕涂擦后，再涂于血液瓊脂培養(yǎng)基—側，然后改用滅菌接種環(huán)作分離劃線接種。蓋上皿蓋，37℃孵育24小時（或者采用咳喋法）?！窘Y果】（填表10-1）瓊脂平板表面有菌落生長。其中占優(yōu)勢的是一種細小菌落，其周圍有草綠色的不完全溶血環(huán)。此為咽喉部的正常菌群—甲型鏈球菌。（五）實驗結果觀察(
4、填表)細菌分布的實驗結果檢查材料空氣水衣角票證頭發(fā)手指咽喉部細菌生長情況菌落個數實驗體會二、消毒滅菌試驗（一）煮沸與高壓滅菌法【原理】高溫對細菌有明顯的致死作用，主要機制是凝固菌體蛋白質，也可能與細菌DNA單螺旋斷裂、細菌細胞膜功能受損及菌體內電解質濃縮有關。濕熱滅菌法所需溫度比干熱法為低，時間較短。尤其是高壓蒸氣滅菌，因增加壓力而提高沸點，滅菌效果最佳。有芽胞的細菌由于對熱的抵抗力比無芽胞細菌強，所以只有采用高壓蒸氣滅菌法才能將芽胞徹底殺滅?！静牧稀凯傊桨鍍蓧K、肉湯管兩支、大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌肉湯培養(yǎng)物?！痉椒ā竣偃…傊桨鍍蓧K，用記號
5、筆分別在二平板底部玻面上，注明大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌，并分別將二塊平板底玻璃面劃分三等份，于每塊平板的三等份上分別注明對照、加熱100℃10min及加熱121℃20min。②取肉湯管二支，分別注明加熱100℃l0min及加熱121℃20min，用毛細吸管吸取大腸埃希菌肉湯培養(yǎng)物，于上述二支肉湯管中各加入菌液一滴。混勻，再用接種環(huán)于二支肉湯管的任何一管中取一環(huán)菌液接種于大腸埃希菌平板的對照處，然后分別將肉湯管加熱100℃l0min及加熱121℃20min(高壓蒸氣15磅、20min)，再各取一接種環(huán)分別接種于平板的相應部位。枯草芽胞桿菌以同法試
6、驗。③將二塊瓊脂平板接種物置37℃培養(yǎng)24小時，比較培養(yǎng)基上二種細菌的生長情況?！窘Y果觀察】（填表10-2）表10-2煮沸和高壓滅菌實驗結果細菌名稱100℃10分鐘121℃20分鐘未加熱(對照)枯草芽胞桿菌大腸埃希菌結果分析 （二）紫外線殺菌法【原理】波長265～266nm的紫外線因與DNA吸收光譜-致而有明顯的殺菌作用。其機制是使細菌DNA相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，從而破壞DNA構型，干擾其正常復制，導致細菌死亡。紫外線殺菌力雖強，但穿透力弱，故只能用于實驗室、病房或手
7、術室內空氣及物體表面的消毒滅菌。另外，殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼睛等有損傷作用，應注意防護?！静牧稀看竽c埃希菌培養(yǎng)物、瓊脂平板、接種環(huán)、酒精燈、紫外線燈?！痉椒ā竣僖詼缇臃N環(huán)挑取大腸埃希菌培養(yǎng)物，于瓊脂平板上作來回密集劃線接種。②半啟皿蓋(將皿蓋遮住涂面的1／2)，置于紫外線燈下lm以內接受照射30分鐘。③蓋上皿蓋，于37℃培養(yǎng)24小時后觀察結果?！窘Y果觀察】（填空）平板上用黑紙遮蓋部分菌生長，未遮蓋部分菌生長。這說明紫外線具有作用，但力弱。（三）化學消毒法1、皮膚消毒試驗【原理】乙醇可使菌體蛋白脫水凝固或與菌體蛋白、酶蛋白等結合而使之變
8、性失活。70％～75％乙醇在15～30秒即將細菌殺死。但95％的乙醇消毒效果反不如70％～75％為好，因高濃度乙醇使菌體蛋白表面迅速凝固，影響乙醇繼續(xù)
