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《在“組學(xué)”水平上富集鋅指蛋白》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝之處外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得叁盜苤堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了耳月確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者竺名：撩榔簽亨：]期：≥叩髟年∥月廠同學(xué){!立論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解叁盜盤堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)吞津大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以
2、供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)說明)學(xué)位論文作者簽名：磁常靄導(dǎo)師簽簽字同期：z柙孑年易月廠FI簽字同期：加占年舌月．t-同hN0第一章文獻(xiàn)綜述1．1蛋白質(zhì)組學(xué)概述．1．1．1蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展背景“蛋白質(zhì)組”概念是在1995年提出的，表示由基因組編碼的整套蛋白質(zhì)?！暗鞍踪|(zhì)組學(xué)”是研究全套蛋白功能及結(jié)構(gòu)的科學(xué)。蛋白質(zhì)組是動態(tài)的，其復(fù)雜度超過了基因組和轉(zhuǎn)錄組。隨著DNA芯片技術(shù)的發(fā)展，可以在信使RNA水平上分析基因表達(dá)【1J。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可以提供的信息有，個體組織基因活躍程度以及細(xì)胞生長和發(fā)展對
3、外界刺激和疾病的響應(yīng)關(guān)系【2，31。雖然轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)可以反映基因組可編碼的蛋白，然而不能提供表達(dá)蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的最后功能信息。蛋白質(zhì)組學(xué)可以在現(xiàn)象水平上觀察生物過程，可以更好地解釋器官生理和病理狀態(tài)，可以推動診斷學(xué)和治療學(xué)的發(fā)展。蛋白質(zhì)組學(xué)可以提供蛋白質(zhì)含量，位置，化學(xué)修飾以及蛋白質(zhì)相互作用全面而有用的信息，這些信息互補而又不同于基因組學(xué)所能提供的信息14J。圖1-1基因組學(xué)，轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)相互關(guān)系示意圖Figure1-1Schematicrepresentationofrelationshipbetweengenome．transcript
4、omeandproteome圈壙目回墓甲圈瀏曼蒂甲回韉、學(xué)一第一章文獻(xiàn)綜述1．1．2蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)近年，蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)的分離和鑒定技術(shù)得到大力發(fā)展，研究人員可以在“組學(xué)”水平上研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能，獲得蛋白質(zhì)含量，位置，翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)之間相互作用的有用信息。蛋白質(zhì)分析可分兩個階段：蛋白質(zhì)分離階段以及蛋白質(zhì)鑒定階段。經(jīng)典蛋白質(zhì)分析方法為：二維凝膠電泳／基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)；一維或多維液相色譜／電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。下面分別介紹生物質(zhì)譜技術(shù)、二維凝膠電泳技術(shù)和液相色譜技術(shù)。1．1．2．1生物質(zhì)譜技術(shù)隨著生物學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展，特別是
5、蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，生物質(zhì)譜成為分析和鑒定生物大分子極其重要的手段。質(zhì)譜儀可以檢測離子化分析物質(zhì)荷比，主要由五部分組成：入口，用來引入分析物；電離源，用來離子化分析物，使其帶電荷：質(zhì)量分析器，用來分離進(jìn)入電磁場的離子：檢測器，用來檢測到達(dá)分析器末端的離子化分析物；記錄儀，用來收集并記錄檢測到的信息。由于生物大分子容易斷裂，不易被離子化，一開始質(zhì)譜技術(shù)無法廣泛應(yīng)用于生物大分子的鑒定。自從JohnFenn和KoichiTanaka分別發(fā)明了電噴霧電離技術(shù)和基質(zhì)輔助激光解析電離技術(shù)，質(zhì)譜技術(shù)才廣泛應(yīng)用于生物大分子的分析鑒定。1．1．2．1．1基質(zhì)輔助激光解析離
6、子化飛行時間質(zhì)譜(MALDI．TOF．MS)基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜主要由兩部分組成：～I(xiàn)ALDI源，用于離子化樣品；TOF分離器，用于分離不同質(zhì)荷比的離子。MALDI的原理是，用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給生物分子，電離過程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到生物分子或從生物分子得到質(zhì)子，從而使生物分子電離。TOF的原理是，離子在電場作用下加速后，飛過無電場的飛行管道，檢測離子到達(dá)檢測器的飛行時間，由于被檢測離子的質(zhì)荷比(m／z)的開方與離子飛行時間成正比，通過飛行時間可以獲得離子的質(zhì)荷比。TOF質(zhì)量分析器被認(rèn)為是與EALDI的
7、最佳搭配，二者都是脈沖工作方式，在質(zhì)量分析過程中離子損失很少，可以獲‘得很高的靈敏度。MALDI-TOF質(zhì)譜檢測模式包括線性檢測模式和反射檢測模式，圖卜2表示反射檢測模式。反射模式可以大大提高檢測分辨率和準(zhǔn)確度，本文所有實驗都是在正離子反射模式下檢測的。第一章文獻(xiàn)綜述～●-m口h■-、o、、圖l-2質(zhì)譜反射模式示意圖Figurel-2Schematicrepresentationofmassspectrometryreflectionmode1．1．2．1．2電噴霧質(zhì)譜技術(shù)(ESI．MS)電噴霧電離質(zhì)譜技術(shù)(ElectrosprayIonization
8、MassSpectrometry，ESI—MS)是在毛細(xì)管出口處施加一高電壓，所產(chǎn)生的高電場使
