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《實驗八蘆丁含量測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、一、分光光度法的特點二、可見分光光度法與紫外的區(qū)別三、分光光度計測定物質(zhì)含量的原理四、工作曲線法測定蘆丁含量五、本次實驗注意事項六、儀器的操作講解提綱分光光度法的特點（包括紫外和可見）分光光度法與其他測定方法比較有這樣一些特點1、首先，它的應(yīng)用廣泛，在國際上發(fā)表的有關(guān)分析的論文總數(shù)中，分光光度法占28%，我國約占所發(fā)表論文總數(shù)的33%。2、靈敏度高，由于新的顯色劑大量合成，并在應(yīng)用研究方面取得了重要進展，使得測定物質(zhì)的靈敏度提高。3、選擇性好，目前有些元素只要控制適當?shù)娘@色條件就可以直接進行光度法測定。4、準確度高，濃度測量的相對誤差在1～3%范圍5、分
2、析成本低，操作簡便快速?？梢姺止夤舛确ㄅc紫外的區(qū)別：1、光源不同，紫外用氫燈作光源，可見用鎢燈2、測定波長不同，紫外波長范圍180～350nm可見波長范圍320～10003、可見需顯色，紫外不需顯色可見分光光度測定中通常是被測物質(zhì)與顯色劑反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，然后測定其吸光度，進而求得被測物質(zhì)的含量。分光光度計測定物質(zhì)含量的原理：（紫外與可見基本相同）均采用一個能產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置后產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過被測樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，由比爾-朗白定律求得樣品的濃度。實驗八工作曲線法測定蘆丁含量可見分光光度法一、實驗?zāi)?/p>
3、的（1）掌握可見分光光度計的使用（2）掌握光電比色的一般操作。（3）學(xué)會用作圖法及計算器回歸法求蘆丁樣品的濃度蘆丁又名蕓香甙，維生素P，屬黃酮類化合物，臨床上主要用于治療腦溢血，高血壓，視網(wǎng)膜出血等疾病。蘆丁的含量測定有高效液相色譜法，紫外分光光度法和可見分光光度法。黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)性質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有酚羥基和環(huán)酮基結(jié)構(gòu)，可與某些金屬鹽試劑生成有色絡(luò)合物，在510nm波長處有吸收，用可見分光光度計測其含量。二、實驗原理本實驗利用什么原理本實驗利用黃酮甙與亞硝酸鈉、硝酸鋁反應(yīng)在堿性時顯紅色的反應(yīng)測定蘆丁的含量。1顯色反應(yīng)的完全程度（取決于）：介質(zhì)的pH顯色劑的
4、用量反應(yīng)溫度反應(yīng)時間要使得測定濃度準確 應(yīng)當考慮影響測定準確的因素：2吸光度的物理測定條件如何確定反應(yīng)最佳條件在建立方法時，需要通過實驗確定最佳反應(yīng)條件，為此改變其中一個因素（例如介質(zhì)的pH值暫時固定其他因素，顯色后測量相應(yīng)溶液的吸光值，通過吸光度-pH曲線確定反應(yīng)的酸度范圍，其他幾個影響因素的適宜值也可以按這一方法分別確定。三、實驗內(nèi)容儀器光電分光比色計使用方法見附件比色皿的校核將同樣厚度的四個比色皿分別編號標記，都裝空白溶液，在所用波長（510nm）下比較各比色皿的透光率，應(yīng)相同，若有顯著差異，應(yīng)將比色皿重新洗滌后再裝空白溶液測試，經(jīng)洗滌可使透光率的
5、差異減小時，可通過多次洗滌使透光率一致。若經(jīng)幾次洗，仍然不一致可如下校正：以透光率最大的比色皿為100%透光，測定其余各皿的透光率，分別換算成吸收度作為各比色皿的校正值。測定溶液時，以上述100%透光率的比色皿作空白，用其他各皿裝溶液，測得吸收度值然后堿去所用比色皿的校正值。蘆丁的測定（標準曲線制備與蘆丁測定一起完成）精密移取蘆丁標準溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml和樣品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇使成5.0ml→各精密加入亞硝酸鈉溶液（1→20）0.3ml,搖勻，放置6分鐘→各加硝酸鋁（1→20）0.3ml,搖勻，再
6、放置6分鐘?！骷託溲趸c試液4ml,用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘。在510nm波長下測定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶作空白）以濃度為橫坐標，吸收度為縱坐標，繪制標準曲線。測定樣品的濃度。蘆丁的測定各試劑用量編號1234567標準溶液(ml)01.002.003.004.005.00樣品溶液(ml)3.0030%乙醇(ml)5.004.003.002.001.002.00NaNO2(ml)全部都加0.30ml,搖勻后放置6分鐘Al(NO3)3(ml)全部都加0.30ml,搖勻后放置6分鐘NaOH(ml)全部都加4ml,搖勻后放置15分鐘后在510
7、nm條件下測定A結(jié)果1、列出濃度C與吸光度A對應(yīng)表格2、用作圖法繪制蘆丁工作標準曲線3、用計算器回歸求標準曲線方程A=()C+(),要求r=0.998以上4、從圖中讀出蘆丁的濃度,并計算瓶中蘆丁樣品的濃度5、計算器回歸求蘆丁樣品的濃度并計算瓶中蘆丁樣品的濃度。注意事項移液管,容量瓶的正確使用NaOH每吸一次可以放兩個,比色杯不要甩容量瓶易翻倒,注意放好注意放的時間NaNO2加0.3ml,不是0.03ml.標準濃度看黑板,各濃度要計算蒸餾水要加至刻度后搖(用滴管),容量瓶拿在手上看刻度濃度的測定,以1號為空白,從低濃度至高濃度來測.數(shù)據(jù)當場交,報告回去做.
8、四、思考題 相同厚度的各比色皿透光性不一致時，為什么要在經(jīng)過多次洗滌后各皿透光率
