血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定

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1、血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定檢驗教研室一、血脂測定血脂測定項目TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。檢測項目的合理選擇臨床常規(guī)血脂測定：TC、TG、HDL-C及LDL-C這四項，有條件的實驗室可測定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。特殊檢查項目：如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT測定等，多用于科研或臨床特殊病例研究。血脂和脂蛋白檢測前應注意的問題分析前主要影響因素有：1.生物學因素如個體間、性別、年齡和種族等。2．行為因素如飲食、肥胖、吸煙、緊張、飲酒、飲咖啡和鍛煉等。3

2、．臨床因素如①疾病繼發(fā)；②藥物誘導4．標本收集與處理建議：1．抽血前2周保持平時的飲食習慣。2．抽血前3天避免高脂飲食，24小時內不飲酒，不作劇烈運動。3．應在禁食12～14小時后空腹抽血。4．除臥床的患者外，一般應坐位休息5分鐘后抽血。5．抽血前最好停用影響血脂的藥物數天或數周，否則應記錄用藥情況。（一）血清外觀分析（血清冷置試驗）混濁（TG增高）下層濁（VLDL增高）Ⅴ型下層清（VLDL正常）Ⅰ型均勻混濁（VLDL↑）TC正常Ⅳ型上層奶油樣（CM↑）TC增高Ⅱa型TC正常正常人清亮（TG正常）TC↑Ⅱb，Ⅲ型空腹血清測TC4℃過夜測TC（

3、二）血清總膽固醇測定膽固醇是人體重要的脂類成分，具有重要的生理功能，如合成類固醇激素，維生素D3膽汁酸，并構成細胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），膽固醇與動脈粥樣硬化有密切關系，故膽固醇測定是最常用的實驗室檢測項目之一。TC測定方法很多，約200多種，分為化學測定法、酶法、氣相色譜法、高效液相色譜法、核素稀釋質譜法（決定性方法）。1、化學測定法主要有兩類（1）Liberman-Burchard反應簡稱L-B反應，膽固醇經冰醋酸，濃硫酸脫水生成3.5-膽烷二烯陽離子，然后被醋酐，濃硫酸氧化生成綠色的膽烷六烯磺酸。呈色穩(wěn)定性差。（

4、2）Zak反應膽固醇經冰醋酸，濃硫酸脫水生成3.5-膽烷二烯陽離子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫紅色膽烷四烯陽離子，靈敏度較L-B反應高7倍，且呈色穩(wěn)定性好，但試劑腐蝕性極大，不能用于自動化分析。2、酶法膽固醇酯膽固醇＋脂肪酸膽固醇＋O2膽烷-4-烯-3酮＋H2O2H2O2＋4AAP＋酚紅色亞胺醌＋H2OCEHChODPOD試劑中除上述三種酶外，還有膽酸鈉和表面活性劑及穩(wěn)定劑，膽酸鈉用于激活CEH，表面活性劑促進膽固醇從脂蛋白中釋放。酶法操作簡便，快速，試劑無腐蝕性，適合于自動化分析，但也存在有一些不足，CEH對膽固醇水解不完全，表面活性劑

5、影響CEH活性，黃疸血清中過高的膽紅素可還原H2O2使結果偏低?！緟⒖挤秶?.10～5.70mmol/L【臨床意義】血清TC含量受年齡、性別、飲食和運動等因素的影響。①20歲以上隨年齡↑而↑，70歲以后則有下降趨勢。②20～40歲階段男性高于女性，但女性絕經后則高于男性。③城市人群高于農村人群，與飲食和運動有關。④腦力勞動者高于體力勞動者。病理性高膽固醇血癥原發(fā)性高膽固醇血癥、糖尿病、膽道阻塞、腎病綜合癥、甲狀腺功能減退。病理性低膽固醇血癥嚴重貧血、甲亢、營養(yǎng)不良。（三）血清甘油三脂測定TG是有一分子甘油與三分子脂肪酸組成的化合物，主要存在

6、于VLDL和CM中，臨床化學中往往以測定甘油代表TG的含量。TG的測定方法很多，如氣相色譜法、高效液相色譜法、紅外分光光度法。但上述方法需特殊的儀器設備和技術，故一般只用于研究工作中。臨床實驗室主要用化學法和酶法。1、化學法基本步驟可歸納為四步（1）提?。焊视腿奶崛〔捎煤线m的溶劑，使脂蛋白變性提取TG，同時去除干擾物質(磷脂、游離甘油、葡萄糖等),常用方法有：1）異丙醇抽提，沸石合劑（沸石、高嶺土）吸附。2）異丙醇抽提，氧化鋁吸附磷脂。3）正壬烷、異丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用價廉的正庚烷代替正壬烷。應用較廣。（2）皂化

7、：甘油三脂的水解一般都采用KOH乙醇或KOH異丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。（3）氧化：甘油的氧化最常用的氧化劑是HIO4，甘油在酸性條件下被氧化成甲醛、甲酸。反應受α-磷酸甘油、葡萄糖、絲氨酸的干擾，故抽提時應盡量除去此類物質的干擾。（4）顯色：顯色測定甲醛。常用方法有：1）甲醛與變色酸（4.5-二羥-2.7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加熱生成紫紅色化合物。（570nm）2）甲醛與乙酰丙酮在氨的存在下縮合成黃色的3.5-二乙酰-1.4-二氫-2.6-二甲基吡啶。（420nm）2、酶法常用的有：（1）磷酸甘油氧化酶法（GK-G

8、POD-POD法）TG＋H2O甘油＋FA甘油＋ATP3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2磷酸二羥丙酮＋H2O2H2O2＋4-AAP＋酚紅色亞胺醌＋H2O試劑較穩(wěn)定