畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)

《畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)CasparGu2010-2-25原核表達(dá)系統(tǒng)酵母表達(dá)系統(tǒng)1234昆蟲-桿狀病哺乳動(dòng)物細(xì)胞毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)目錄簡(jiǎn)述步驟Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn簡(jiǎn)述發(fā)展歷史?KoichiOgata等人于1969年首次發(fā)現(xiàn)了某些酵母可以利用甲醇為唯一碳源和能源生長(zhǎng)(Ogata,eta1.1969)；?此后，七十年代應(yīng)用于單細(xì)胞蛋白飼料的表達(dá)；?1987年，Cregg等人首次用甲醇營(yíng)養(yǎng)型酵母表達(dá)乙型肝炎表面抗原。優(yōu)點(diǎn)?表達(dá)效率高，既可胞內(nèi)表達(dá)，又可分泌表達(dá)；?培養(yǎng)簡(jiǎn)單廉價(jià)；?翻譯后修飾；?具有強(qiáng)啟動(dòng)子

2、AOX1；?外源基因穩(wěn)定，隨基因組復(fù)制；?能以甲醇作唯一碳源。缺點(diǎn)?表達(dá)周期長(zhǎng)；?甲醇一定的危險(xiǎn)性；?有時(shí)會(huì)出現(xiàn)蛋白切割功能。Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn步驟1分子克隆2感受態(tài)制備3轉(zhuǎn)化和篩選4擴(kuò)大培養(yǎng)5蛋白純化Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn1分子克隆設(shè)計(jì)引物組DNAPCR常用載體：pPIC9K，pPICZα，pGAPCZα。電擊轉(zhuǎn)化Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.

3、chiscientific.cn2感受態(tài)制備YPDYPDYPDOD值1.3~1.5!水水山梨醇山梨醇重懸Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn3轉(zhuǎn)化和篩選分子克隆GS115pPIC9K-GDH電轉(zhuǎn)化MHis+DMMMMut+D1g2g4gG418多拷貝/L/L/L最佳時(shí)間擴(kuò)大培養(yǎng)下游純化BMGYBMMYTel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn4擴(kuò)大培養(yǎng)甲醇濃度培養(yǎng)時(shí)間獲取上清Tel:0510-86419770Fax:0510-86419

4、769Web:www.chiscientific.cn5蛋白純化硫酸銨過(guò)夜離心，去上清溶解親和層析超濾除咪唑、鹽交付凍干Tel:0510-86419770Fax:0510-86419769Web:www.chiscientific.cn