血液標(biāo)本收集和保存..

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1、血液標(biāo)本的收集和保存方法說明：一般建議用新鮮的血液標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果標(biāo)本已經(jīng)保存較長(zhǎng)時(shí)間，請(qǐng)聯(lián)系康成公司技術(shù)部，以確認(rèn)樣本是否適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。一、全血收集請(qǐng)按照實(shí)際使用的收集方法，如注射器收集或真空收集管等，參考相應(yīng)的廠商提供產(chǎn)品說明進(jìn)行操作。采集好全血，將采集好的全血轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管，按照每400~500ul/管分裝好。短期保存，可放入-20°C或-70°C冰箱。長(zhǎng)期保存，請(qǐng)放入液氮。二、血漿收集為獲得血漿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng)使用抗凝管采集全血，并盡快進(jìn)行血漿分離：1000g離心10分鐘，分離血漿和細(xì)胞組分。將采集好的血漿轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管，按照每400~500ul/管分裝好。短期保存，可放

2、入-20°C或-70°C冰箱。長(zhǎng)期保存，請(qǐng)放入液氮。圖片來源：Exiqon‘QuantificationofMicroRNAexpressioninBloodPlasma/SerumSamples’注意：血漿收集應(yīng)使用抗凝管，抗凝劑可以用檸檬酸鈉或EDTA等，但一定不要使用肝素抗凝，因?yàn)楦嗡貙?duì)RNA實(shí)驗(yàn)有較大影響三、血清收集為獲得血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng)使用凝血管采集全血，采血后兩小時(shí)內(nèi)分離血清。采血后輕輕倒轉(zhuǎn)采血管混合4~5次，直立置于室溫待血液完全凝固（一般約一小時(shí)），1000g離心10分鐘，分離血清。將采集好的血清轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的凍存管，按照每400~500ul/管分裝好。短期保存，可放入-

3、20°C或-70°C冰箱。長(zhǎng)期保存，請(qǐng)放入液氮。四、血清、血漿和全血樣本的保存和運(yùn)輸→microRNA芯片檢測(cè)血清、血漿或全血標(biāo)本約需要1~2ml的量（即每份樣品2~4管）?！跇悠繁４婕稗D(zhuǎn)移的過程中，應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。→運(yùn)輸過程必須使用足量干冰保證始終低溫。干冰量至少為8公斤（足量），且運(yùn)輸用厚壁泡沫箱，且需用封箱帶密封。注：保存血清，血漿或者全血所使用的1.5ml凍存管或離心管，操作中使用的槍頭等必須高溫滅菌，裝好樣品后管口需要以封口膜封好。參考文獻(xiàn)：1.SignaturemicroRNAExpressionProfileofEssentialHypertensionandIts

4、NovelLinktoHumanCytomegalovirusInfection.LiS.,etal.,Circulation,2011.2.CharacterizationofmicroRNAsinserum:anovelclassofbiomarkersfordiagnosisofcancerandotherdiseases.XiC.,etal.,CellResearch,2008.附：TRI抽提RNAprotocol→如果條件允許，亦可采用TRIReagentBD保存全血、血漿和血清，并抽提其中的RNA→TRIReagentBD（Forprocessingwholeblood,p

5、lasma,orserum）可以從Sigma或者M(jìn)RC(MolecularResearchCenter)訂購(gòu)1、RNA的抽提采用TRIReagentBD從全血、血漿和血清中抽提RNA，整個(gè)過程可以在1小時(shí)內(nèi)完成，完整的RNA的得率比其他的抽提方法高30－150％。其他方法抽提的RNA的完整性都不如TRIReagentBD，特別是采用柱離心式抽提方法很可能改變RNA的組成。TRIReagentBD尤其適用于抽提病＋毒RNA。抽提得到的RNA可用于northern、dotblotbybridization、polyAselection、invitrotranslation、RNasepro

6、tectionassay、molecularcloning和PCR。實(shí)驗(yàn)方法需要自備的試劑：1‐bromo‐3‐chloropropane（溴氯丙烷，BCP）或氯仿、異丙醇、乙醇和5N醋酸建議使用一次性的聚丙烯離心管，并可承受12,000g離心。1、裂解：0.75mlTRIReagentBD＋0.2‐0.25ml全血、血漿或血清2、兩相分離：裂解液＋0.1ml溴氯丙烷或0.2ml氯仿3、RNA沉淀：水相層＋0.5ml異丙醇4、洗RNA：1ml75％乙醇5、RNA溶解：FORMAzol、0.5%SDS、或水實(shí)驗(yàn)在室溫中進(jìn)行，除非特定步驟。1、裂解A、血清：加入0.25ml血清和2‐8ul

7、PolyacrylCarrier（Cat.No.PC152）到0.75mlTRIReagentBD中，蓋上蓋子，用手或震蕩器晃動(dòng)離心管直至充分混勻。B、全血或血漿：加入0.2ml全血或血漿到0.75mlTRIReagentBD，每0.2ml全血或血漿添加20ul5N醋酸，蓋上蓋子，用手或震蕩器晃動(dòng)離心管直至充分混勻。醋酸可以在混合血液樣品前的TRIReagentBD中添加，也可混合后添加。用1ml冰醋酸（>99％）與2.48ml水混合制備5N的