黃曲霉毒素的檢測方法研究

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1、黃曲霉毒素的檢測方法研究郝瑤生工1班20110801111摘要：黃曲霉毒素為毒性極強的致癌物質(zhì)，因其廣泛分布于動物與植物等的食品中而成為食品安全檢測的重要問題，對該毒素的檢測技術特別是快速檢測方法對保障農(nóng)產(chǎn)品及食品消費安全具有特別重要意義。本文介紹了常用的三種黃曲霉毒素檢測方法，即薄層層析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法。關鍵詞：黃曲霉毒素；食品安全；檢測方法1前言黃曲霉毒索是一種劇毒和強致癌物質(zhì)，是一類化7結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫咲喃香豆素的衍牛物，可分為B】、B?、Gi、G：?、M.s血等。Bi為黃曲霉毒素中毒性及致癌性最強的物質(zhì)，是間接致癌物，進入人體內(nèi)經(jīng)氧化代謝陸活化后形成的活性中

2、間代謝產(chǎn)物與DNA大分子結(jié)合，導致細胞遺傳特性改變，進而發(fā)揮其致癌致突變效應，乂可被另一類代謝酶代謝解毒，使終致癌物結(jié)構(gòu)發(fā)牛?改變而不能攻擊DNA實現(xiàn)機體的自身保護作用。從物種上說，黃曲霉毒素存在于土壤、動植物、各種堅果，特別是花生和核桃中。黃曲霉毒素(aflatoxin,AFT)主要是由黃曲霉和寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的一類冇毒次生代謝物。在世界不同地區(qū)都發(fā)現(xiàn)了這些真菌大量存在于供人類食用的食品中，黃曲霉痔素污染已導致嚴重的食品安全問題2Jo自20世紀60年代以來，冇關黃曲霉毒素的危害被大量報道，以致黃曲霉毒素已成為最受人們關注的一種真菌毒素⑶。因此，尋求準確、快速、簡便的檢測方法，對黃曲霉毒素進

3、行高效的定性定量分析，是黃曲霉毒素研究的一個重要方面。1993年，黃曲霉毒素被世界衛(wèi)牛組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為一類致癌物，世界公認的三大強致癌物質(zhì)之一，是一種劇毒物質(zhì)⑷。2黃曲霉毒素研究概況迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素至少包含黃曲霉毒素B】、G】、@、M】、M2等17種結(jié)構(gòu)相似冃?特征已知的化合物，其結(jié)構(gòu)特征為都含冇一個雙咲喃環(huán)和一個氧雜蔡鄰酮。黃曲霉毒素的理化性質(zhì)比較穩(wěn)定，如b在高溫200e、紫外線照射下，都不能使之破壞，加熱到B】的熔點(26曠269e)才開始分解;在酸性溶液中也很穩(wěn)定，在pH廣3的強酸性溶液中則稍冇分解⑸黃曲霉毒素的毒性為亂化鉀的10倍，砒霜的68倍，能引起人

4、急性中毒死匸，與人的肝癌有密切關系，能使家畜、家禽及多種實驗動物誘發(fā)癌癥，其中已、B八Gi、G：是最主要的毒素物質(zhì)，而Bi自然發(fā)生潛力最大的一種毒素⑹。黃曲霉毒素對人和動物健康的危害均與黃曲霉毒素抑制蛋白質(zhì)的合成冇關，黃曲霉毒素分子中的雙II夫喃環(huán)結(jié)構(gòu)是產(chǎn)牛痔性的重要結(jié)構(gòu)，研究表明黃曲霉毒素的細胞毒作用可T擾信息RNA和DNA的合成，進而干擾細胞蛋白質(zhì)的合成，導致動物全身性損害。3黃曲霉毒素的檢測方法黃曲霉毒素的檢測方法從最初以薄層層析法為主，發(fā)展到高效液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應用，其進展與新的化學檢測手段和新儀器的出現(xiàn)密不對分。這些新方法、新手段的快速應用，為黃曲霉毒

5、素的檢測提供了更廣泛的選擇余地，適應了不同的檢測目的和要求。3.1薄層層析法(TLC)薄層層析法是測定黃曲霉毒素的經(jīng)典方法，其原理是將樣品經(jīng)過提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在波氏365nm紫外光下產(chǎn)生藍紫色或黃綠色熒光，并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來確定其含雖。聶孝同等⑺應川薄層層析法采川以卜步驟對飼料屮的黃

6、11

7、霉毒索進行了檢測。首先是黃Illi霉毒索的提取:把粉碎過20目篩的樣品放入具塞三角瓶屮，加入甲醇(55B45)溶液，再加入石汕讎蓋嚴，靜置片刻示，用慢速定量濾紙過濾于分液漏斗屮，通入三氯甲烷，再過濾并將濾液在65e水浴上通風揮干，冷卻后加入苯-乙M(98B2)充分混合，

8、然后吸取上清液待用。對雜質(zhì)少的樣品，采取直板定性，依次點板、展開、觀察;其中預展展開劑為無水乙瞇，正展展開劑為丙啊-三氯甲烷(1B9),.R展開劑要事先加入到展開槽內(nèi)；通過觀察，無熒光出現(xiàn)為陰性，出現(xiàn)熒光則為陽性，需作直板確證，若繼續(xù)有熒光出現(xiàn)，則進一步作定量確證;樣品的某一點熒光強度與標樣點的熒光強度相一致，則取此點為樣木的黃曲霉毒素含錄值，否則作稀釋定量檢測;但是對于雜質(zhì)多的樣品，須采取橫板定性；同樣經(jīng)過點板、展開、觀察，有熒光者為陽性檢出，進一步作橫向確證，經(jīng)再次檢測觀察呈陽性，則需要定量確證黃Illi每毒索含量。為了提高薄層層析法的精度,建立薄層掃描法來測定黃曲每毒素，它是薄層層析法的

9、儀器化，樣品的處理和層析條件與薄層層析法相同，只是在標準品的設定和結(jié)果判定上有所不同。楊敘等⑻把粉碎過篩的樣品加水濕潤后通入氯仿過濾，TLC法較適合于對黃曲霉毒素的定性檢測,是研究黃Illi霉毒索初期所使川的主耍方法。該檢測方法所用設備簡單、費川低廉、容易掌握，適用人量樣品的分離、篩選，一般的實驗室均對開展，屬于定性和半定量檢測。TLC有單向展開和雙向展開法，其中雙向展開法能進一步除去樣品中的雜質(zhì)