雙特異性抗體

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1、ISSN1007-8738細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志(ChinJCellMolImmunol)2003,19(5)519·綜述·文章編號(hào):1007-8738(2003)05-519-03雙特異性IgG的研究進(jìn)展方　敏,黃華　(中國(guó)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所,北京100101)關(guān)鍵詞:雙特異性IgG;knobs2into2holes;二硫鍵;鹽鍵而應(yīng)用相同的輕鏈來(lái)構(gòu)建BsIgG徹底解決了輕鏈的錯(cuò)配問(wèn)題。中圖分類(lèi)號(hào):Q511　　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A2.1　改造抗體重鏈?zhǔn)剐纬僧愒炊垠w　人IgG分子中蛋白2蛋白相互作用最強(qiáng)的部位是重鏈CH3區(qū)域,而CH2區(qū)域是通　　傳統(tǒng)的免疫球蛋白只能結(jié)合單一特異性的

2、抗原分子,而過(guò)其相連的碳水化合物發(fā)生相互作用的。CH3區(qū)域決定了抗雙特異性抗體的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)具有不同的特異性,能夠體重鏈間的交聯(lián),因此,改造CH3區(qū)域,可以使之更易于形成結(jié)合不同的抗原分子。雙特異性抗體在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是異源二聚體。改造的指導(dǎo)原則是互補(bǔ)結(jié)合。改造的策略包在腫瘤免疫治療方面已取得了較大成就。鑒于用傳統(tǒng)的方法括:knobs2into2holes、鏈間二硫鍵和鹽鍵。①knobs2into2holes:很難大量制備符合臨床要求的雙特異性抗體,近年來(lái),雙特knob突變是在第1個(gè)CH3區(qū)域中用1個(gè)大側(cè)鏈氨基酸取代1[6]異性抗體片斷制備技術(shù)進(jìn)展很快。然而,在雙特異性抗體的個(gè)小側(cè)

3、鏈氨基酸得到。例如:T366Y。而在第2個(gè)CH3區(qū)域臨床應(yīng)用中,許多需要其具備完整的IgG形式。因?yàn)檫@種形中相互補(bǔ)位置由1個(gè)小側(cè)鏈氨基酸取代1個(gè)大側(cè)鏈氨基酸引[6]式含有包括CH2區(qū)域和CH3區(qū)域的Fc片段,可以提供較長(zhǎng)的入1個(gè)hole,例如:Y407T。由于空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ),第1個(gè)CH3血漿半壽期及引發(fā)效應(yīng)功能。因此,隨著高效制備雙特異性區(qū)域中的knob插入到第2個(gè)CH3區(qū)域中的hole而形成異源二IgG(BsIgG)新技術(shù)的日臻成熟,BsIgG的應(yīng)用研究將會(huì)進(jìn)一步聚體。②鏈間二硫鍵:經(jīng)過(guò)分子模擬后,選擇合適的氨基酸深入。殘基突變?yōu)榘腚装彼?通過(guò)兩條鏈上的半胱氨酸形成CH3域間二硫鍵而介導(dǎo)

4、形成異源二聚體。③鹽鍵:在CH3區(qū)域的相1　制備雙特異性抗體的傳統(tǒng)方法交面,分別將兩條鏈上相對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基突變成帶相反的早在單克隆抗體(mAb)出現(xiàn)前,人們就已經(jīng)知道雙特異電荷,這樣通過(guò)電荷之間的相互作用,使兩條鏈異源二聚化。[7]性抗體。最早具有雙特異性的抗體出現(xiàn)在1961年[1],是將兩Knobs2into2holes突變可以用噬菌體展示技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化。種不同特異性的多克隆抗體的Fab片斷混合物經(jīng)過(guò)溫和氧化先在1條CH3鏈上產(chǎn)生1個(gè)CH3knob突變(T366W)。CH3hole而制備的。在體外用化學(xué)交聯(lián)劑可將兩種不同特異性的mAb突變庫(kù)通過(guò)對(duì)另1條CH3鏈上的366,368和407

5、位氨基酸殘或抗體片斷通過(guò)二硫鍵或硫醚鍵連成雙特異性抗體[2]。該方基的隨機(jī)突變產(chǎn)生。這3個(gè)氨基酸殘基與第一條鏈上的knob法可快速、大量制備雙特異性抗體,但在交聯(lián)過(guò)程中抗體時(shí)有突變相對(duì)應(yīng)。CH3knob突變與1個(gè)flag肽融合,而CH3hole突失活,而且難于保證產(chǎn)物的勻質(zhì)性。變庫(kù)與M13基因III融合。噬菌體展示的穩(wěn)定CH3異二聚體廣泛應(yīng)用的雙特異性抗體生產(chǎn)方法是在二次雜交瘤中共可以用抗flag抗體選擇性回收。其中的1個(gè)異二聚體,表達(dá)兩種不同特異性的mAb[3〗。但是,共表達(dá)兩種不同的T366W2T366’S:L368’A:Y407’V的tm為69.4℃,比以前設(shè)計(jì)的mAb會(huì)產(chǎn)生9種

6、不需要的輕、重鏈配對(duì)產(chǎn)物,有活性的BsIgGT366W2Y407’A的tm高4℃,比野生型同源二聚體的tm低11℃。用含有該突變的CD42IgG和抗CD3重鏈以及抗CD3輕大約僅占10%～50%。而且,從這些結(jié)構(gòu)相似的抗體中分離鏈共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,則可產(chǎn)生大于85%的抗體/免疫黏附素純化目的蛋白也費(fèi)時(shí)費(fèi)力。盡管如此,到現(xiàn)在,已有至少5(Ab/IA)異二聚體。種由二次雜交瘤所分離純化的BsIgG或酶解的BsF(ab′)2在進(jìn)[4]同時(shí),經(jīng)過(guò)分子模擬后,6對(duì)CH3區(qū)域的氨基酸殘基選擇行小規(guī)模的臨床實(shí)驗(yàn)。用作半胱氨酸置換。這些氨基酸殘基對(duì)位于CH3區(qū)域相交面上,靠近CH2區(qū)域(K392C和D3

7、99’C,V397C和T394’C),或者2　制備BsIgG的新途徑[5]遠(yuǎn)離CH2區(qū)域(S354C和L351’C,S354C、E356C、E357C和1998年,Merchant等改進(jìn)了制備BsIgG的方法,基本解Y349’C)。而經(jīng)噬菌體庫(kù)篩選出來(lái)的knobs2into2holes突變決了抗體輕、重鏈的錯(cuò)配。應(yīng)用基因工程的方法改造重鏈,使(T366W/T366’S:L368’A:Y407’V)位于CH3區(qū)域相交面中心。之更傾向于