核盤菌C2H2型鋅指蛋白轉錄因子SsSte12的功能研究

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1、分類號：S432.1單位代碼：10183研究生學號：2015862021密級：公開吉林大學碩士學位論文（學術學位）核盤菌C2H2型鋅指蛋白轉錄因子SsSte12的功能研究TheFunctionalAnalysisofC2H2TypeTranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：徐廷滔專業(yè)：植物保護研究方向：植物病原真菌學指導教師：張艷華教授培養(yǎng)單位：植物科學學院2018年6月核盤菌C2H2型鋅指蛋白轉錄因子SsSte12的功能研究TheFunctionalAnalysisofC2H2Type

2、TranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：徐廷滔專業(yè)名稱：植物保護指導教師：張艷華教授學位類別：農學碩士答辯日期：2018年5月28日未經本論文作者的書面授權，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個人，均不得對本論文的全部或部分內容進行任何形式的復制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權的商業(yè)性使用（但純學術性使用不在此限）。否則，應承擔侵權的法律責任。吉林大學碩士學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交學位論文，是本人在指導教師的指導下，獨立進

3、行研宄工作所取得的成果。除文中己經注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研宄做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明＞本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。■３學位論文作者簽名：％曰期：丨｛ｆ年汐月曰／中文摘要核盤菌C2H2型鋅指蛋白轉錄因子SsSte12的功能研究核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）是一種具有危害性的農業(yè)病原菌，每年都會在全球范圍內造成巨大的經濟損失。核盤菌的菌核和侵染墊結構在其長期存活以及成功侵染廣泛的宿主中扮演著至關重要的角色。

4、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）級聯(lián)在菌核發(fā)育和致病侵染等方面充當著核心信號傳導復合物的重要作用。本研究對核盤菌MAPK級聯(lián)中假定的下游轉錄因子SsSte12進行了分析。首先從核盤菌cDNA中克隆得到SsSte12基因編碼序列，全長2085bp，含有STE和Zf-C2H2兩個保守結構域。設計了兩個沉默靶點pSD2Target和pSD3Target，成功構建得到沉默載體pSD2-SsSte12和pSD3-SsSte12。利用PEG-GaCl2介導的核盤菌原生質體轉化得到沉默轉化子，經過鑒定篩選得到8個陽性SsSte12RNAi突變體菌株pSD2-1、pSD2

5、-4、pSD2-11、pSD2-12、pSD3-1、pSD3-4、pSD3-7和pSD3-8作為后續(xù)研究。為了闡述SsSte12基因的功能，對8個SsSte12RNAi突變體菌株和野生型核盤菌UF-1進行了以下研究：（1）菌落形態(tài)和生長速率對比分析；（2）菌核形成數(shù)量和菌核干重對比分析；（3）顯微觀察菌絲形態(tài)和侵染墊的形成情況；（4）全葉法、半葉法和傷口侵染實驗觀察RNAi突變體和UF-1侵染離體植物宿主時的致病力。結果表明SsSte12RNAi突變體導致了菌絲營養(yǎng)生長變緩慢、菌核個體變小以及形成較少的附著胞，因此，SsSte12RNAi突變體也減弱了侵染

6、宿主植物的致病力。酵母雙雜交（Y2H）檢測和雙分子熒光互補實驗（BiFC）驗證了SsSte12和SsMCM1轉錄因子在細胞核中存在相互作用，但是qRT-PCR實驗表明SsSte12RNAi突變體中SsMCM1的表達與SsSte12無關。結合在核盤菌早期發(fā)育過程中伴隨著高SsSte12基因轉錄物的積累，我們的結果表明SsSte12作為MAPK的下I游轉錄因子在菌絲生長、菌核發(fā)育和附著胞形成中扮演著調控作用，而SsSTE12和SsMCM1的相互作用可能在調控核盤菌編碼這些性狀的基因中發(fā)揮重要作用。關鍵詞：SsSte12，核盤菌，菌核發(fā)育，附著胞，致病性，SsM

7、cm1IIAbstractTheFunctionalAnalysisofTheC2H2TypeTranscriptionFactorSsSte12inSclerotiniasclerotiorumSclerotiniasclerotiorumisonechallengingagriculturalpathogentomanageandcauseslargeglobaleconomiclossesannually.Thesclerotiumandinfectioncushionsarecriticalforitslong-termsurvivalandsuc

8、cessfulpenetrationonbroadofhosts.