核盤菌轉錄因子SsAMS2的功能研究

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1、分類號：Ｓ４３２．１單位代碼０１８３：１研究生學號：２０１５８６２０２０密級：公開＿吉林大學碩士學位論文學術學位（）核盤菌轉錄因子ＳｓＡＭＳ２的功能研究ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＳｓＡＭＳ２ｉｎＳｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ作者姓名：王翹楚專業(yè)：植物保護研究方向：植物病原真菌分子生物學指導教師：潘洪玉教授培養(yǎng)單位：植物科學學院２０１８年６月核盤菌轉錄因子SsAMS2的功能研究Functionalanalys

2、isofthetranscriptionfactorSsAMS2inSclerotiniasclerotiorum作者姓名：王翹楚專業(yè)名稱：植物保護指導教師：潘洪玉教授學位類別：農學碩士答辯日期：2018年5月28日未經本論文作者的書面授權，依法收存和保管本論文書面版本、電子版本的任何單位和個人，均不得對本論文的全部或部分內容進行任何形式的復制、修改、發(fā)行、出租、改編等有礙作者著作權的商業(yè)性使用（但純學術性使用不在此限）。否則，應承擔侵權的法律責任。吉林大學博士或碩士學位論文原創(chuàng)性聲明（）本人鄭重聲明，：所呈交學位論文，是

3、本人在指號教師的指導下獨立進行研宄工作所取得的成果，。除文中已經注明引用的內容外本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的作品成果＝對本文的研宂做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式?。崳姡海墭嗣鳌１救送耆庾R到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：曰期山丨？年（！月今曰中文摘要核盤菌轉錄因子SsAMS2的功能研究核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary）是一種死體營養(yǎng)型植物病原真菌，可以侵染400多種植物，在世界范圍內造成巨大的經濟損失。侵染墊是核盤菌重要的侵染結構，

4、在侵入寄主組織中起決定性作用，在與寄主互作過程中，核盤菌能夠產生一系列的致病因子，草酸在破壞細胞結構，降低寄主抗性方面具有重要作用，是核盤菌的重要致病因子。在核盤菌中存在9個含有GATA鋅指結構域的轉錄因子。其中，SsNsd1已有研究能夠調控菌核、子囊盤、侵染墊的形成與發(fā)育，并對核盤菌精孢子的產生有負調控作用。SsAMS2也是一個GATA轉錄因子，與裂殖酵母中的Ams2具有同源性，推斷其在調控組蛋白基因轉錄起始中起重要作用。本研究克隆得到SsAms2基因的兩個靶序列，并連接于RNAi載體pSilent-Dual上，將重組質粒轉入核盤菌原生質體后對基因S

5、sAms2進行沉默，得到沉默轉化子，發(fā)現沉默轉化子中SsAms2基因的表達量顯著下降。進一步分析沉默轉化子與野生型的表型差異，在核盤菌的生長發(fā)育方面，沉默轉化子的菌絲生長速率變慢，菌核形成總重量降低，菌絲彎曲，分枝顯直角，且分枝菌絲生長短小。同時發(fā)現沉默轉化子的菌絲中細胞核數量減少。通過對組蛋白（H2A，H2B，H3，H4）及組蛋白H3變異體CENP-A編碼基因的表達量分析，組蛋白基因均出現下調。對細胞周期調控蛋白Cdc6，Cdc28進行表達量分析，其表達量也出現下調。研究結果暗示SsAMS2能夠調控S期組蛋白基因的轉錄，影響細胞的分裂過程，從而調控核

6、盤菌的生長過程。SsAms2被沉默后，在含過氧化氫平板上生長的核盤菌相對于野生型并未受到抑制，反而有抗性增強的趨勢，推測SsAms2對過氧化物酶的產生有負調控作用。在抗高鹽滲透脅迫環(huán)境下，野生型及沉默轉化子的抑制效果無顯著差異，證明SsAms2不參與調控高滲透抗性。此外，沉默轉化子的侵染墊形成顯著減少，草酸的產生量也明顯減少。通過離體菜豆葉片接種實驗，離體葉片的發(fā)病速度顯著降低，進一步闡明SsAms2在核盤菌致病性方面具有重要調控作用。I上述有關核盤菌轉錄因子基因SsAms2的功能研究，進一步加深了對核盤菌生長發(fā)育與致病機制的解析問題探索與解析，為菌核

7、病的防治提供新理論與新思路。關鍵詞：核盤菌，轉錄因子，SsAms2，生長發(fā)育，致病性IIAbstractFunctionalanalysisofthetranscriptionfactorSsAMS2inSclerotiniasclerotiorumSclerotiniasclerotiorumisanecrotrophicplantpathogencausingsignificantfinancialloss.Over400plantspeciescanbeinfectedbyS.sclerotiorum.Infectioncushionisthei

8、mportantinfectionstructurewhichplaysadecisivero