抗氧化物活性測(cè)定方法總結(jié)

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1、抗氧化物活性測(cè)定方法（傾向于考慮DPPH法和ORAC法）1.FRAP法:鐵離子還原抗氧化能力測(cè)定法[杜芹芹、張旭等，人參與附子、黃連配伍的HPLC-ESI-MS研究及抗氧化活性測(cè)定。高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)。2010,31（7）：1332-1336]FRAP(ferricionreducingantioxidantpower)方法，在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+-TPTz(Fe3+-三吡啶三嗪)被抗氧化劑還原成有色的Fe2+-TPTZ。反應(yīng)的結(jié)果常以Fe2+當(dāng)量或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的抗氧化能力表示。該法快速簡(jiǎn)便、易于操作、重復(fù)性好，

2、但FRAP反應(yīng)屬于電子轉(zhuǎn)移(SET)反應(yīng)，因此FRAP方法不能夠測(cè)定氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)(HAT)起作用的物質(zhì)。而且該法實(shí)際測(cè)定的是待測(cè)生物活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+的能力，因此沒(méi)有抗氧化能力的生物學(xué)相關(guān)性。2.TEAC法(troloxequivalentantioxidantcapacity)ABTS(2,2'-amino-di(2-ethyl-benzothiazolinesulphonicacid-6)ammoniumsalt,2,2'氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)銨鹽)與過(guò)氧化物酶和氫過(guò)氧化物在一起

3、形成ABTS+陽(yáng)離子自由基。在抗氧化劑存在時(shí)，這種自由基混合物的光吸收值下降，下降程度取決于抗氧化劑的抗氧化能力，測(cè)得的結(jié)果以TEAC表示，即被測(cè)抗氧化劑清除ABTS·+的能力(吸光度大小的變化)與標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑trolox(VE的水溶性類似物)清除ABTS·+的能力的比值。TEAC法十分簡(jiǎn)單，適用于大量樣品的分析檢測(cè)。但是，ABTS·+并非生理自由基，缺乏生理相關(guān)性，而且與FRAP方法相似，ABTS·+與不同抗氧化劑問(wèn)的氧化反應(yīng)時(shí)間不同，因此，只能定性不能定量評(píng)價(jià)樣品的抗氧化能力。3.DPPH法[張薇，張惠展，袁

4、勤生。串葉松香草水提液的體外抗氧化活性研究。食品與藥品。2012,14（5）：168-171，陳樹(shù)俊1，馮斌1，劉誠(chéng)等。山西老陳醋多酚提取物抗氧化活性研究。食品科學(xué)，2012,33（1）：31-34](2，2-diphenyt-l-picrylhydrazylradicalscavengingcapacity)DPPH·(二苯代苦味肼基自由基)法是較常用的方法之一。DPPH·是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其醇溶液呈深紫色,在517nm處有一吸收峰。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中存在自由基清除劑時(shí)，它可以和DPPH·的單電子配對(duì)而

5、使517nm處的吸收峰漸漸消退。而且，這種顏色變淺的程度與配對(duì)電子數(shù)成化學(xué)計(jì)量關(guān)系。因此，根據(jù)吸光度的變化可測(cè)得抗氧化劑的活性。通過(guò)計(jì)算DPPH自由基剩余一半時(shí)所需抗氧化劑的濃度(EC50)以及時(shí)間(TEC50)反應(yīng)抗氧化物的活性。DPPH法快速、簡(jiǎn)單，僅需要一臺(tái)紫外分光光度計(jì)就可以測(cè)定，但DPPH方法存在的不足是，當(dāng)被測(cè)物與DPPH紫外吸收有重疊時(shí)，將會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，比如類胡蘿卜素。此外，由于空間位阻決定反應(yīng)的傾向，小分子化合物由于更易接近自由基而擁有相對(duì)較高的抗氧化能力。此外該方法線性范圍也相對(duì)較窄，而且所有

6、還原劑都能夠?qū)PPH起作用，因此結(jié)果并不能完全代表抗氧化能力。4.ORAC法:氧化自由基吸收能力測(cè)定ORAC(oxygenradicalabsorbancecapacity)是測(cè)定氧化自由基吸收能力，氧化自由基吸收能力又稱為抗氧化能力。以SodiumFluorescein（SF）作為熒光指示物質(zhì)，以AAPH(2,2`-偶氮二(2-甲基丙基咪)二鹽酸鹽)作為自由基來(lái)源，以抗氧化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Trolox作為定量標(biāo)準(zhǔn)。SF受到自由基攻擊，在一定波長(zhǎng)下熒光度不斷衰減，采用熒光分析儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度衰減變化可計(jì)算樣品的自由基清

7、除能力。ORAC方法可以提供的自由基與生命現(xiàn)象中的自由基具有高度一致性，ORAC作用原理是一種經(jīng)典的通過(guò)抑制氫轉(zhuǎn)移反應(yīng)過(guò)程終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。ORAC法測(cè)定的是抗氧化劑抑制體系中活性自由基引起的氧化還原反應(yīng)的能力.ORAC分析方法是一種新的、獨(dú)特的評(píng)價(jià)各種物質(zhì)抗氧化活性的方法，受到美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院（NIH）、美國(guó)宇航局（NASA）及美國(guó)哈佛大學(xué)（HarvardUniversity）等眾多科技研究機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。美國(guó)官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)（AOAC）已將其批準(zhǔn)為國(guó)際AOAC標(biāo)準(zhǔn)方法。同時(shí)在產(chǎn)品研發(fā)、生

8、產(chǎn)、銷售的工業(yè)領(lǐng)域中，作為衡量產(chǎn)品抗氧化能力的標(biāo)準(zhǔn)分析方法已受到業(yè)內(nèi)的廣泛認(rèn)同，并成為各進(jìn)出口企業(yè)實(shí)行國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制的依據(jù)。ORAC法操作方法簡(jiǎn)便，適用于高通量篩選和進(jìn)行常規(guī)質(zhì)量控制。主要的不足之處是所需儀器較為昂貴，而且實(shí)驗(yàn)對(duì)溫度和熒光標(biāo)記物較為敏感，增加了實(shí)驗(yàn)的操作難度。5.TRAP法：總自由基清除抗氧化能力法TRAP(totalperoxylradical-tr