丙型肝炎病毒基因型的研究進(jìn)展

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1、萬方數(shù)據(jù)安徽醫(yī)藥AnhuiMedicalandPharnm℃euticalJournal2009Aug；13(8)·869·丙型肝炎病毒基因型的研究進(jìn)展徐少保1，熊自忠2，高人燾1，沈強(qiáng)1(1．安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院感染病科，安徽合肥230001；2．安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科，安徽合肥230022)關(guān)鍵詞：丙型肝炎病毒；基因型丙型病毒性肝炎(viralhepatitisC)是一種主要經(jīng)血液傳播、由丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)引起的肝臟急、慢性炎癥性疾病。目前，全世界丙型肝炎感染率為3％，由此推算約有1．7億一2．0億人為丙型肝炎病毒(HC

2、V)感染者?，每年新增感染者約為350萬人。在我國，丙型肝炎主要通過輸血傳播舊J，感染總?cè)藬?shù)超過5000萬人，屬HCV的中高度感染區(qū)。HCV基因分型與病程發(fā)展和干擾素治療應(yīng)答有一定相關(guān)性。本文就丙型肝炎基因型的目前國內(nèi)外研究進(jìn)展綜述如下。1丙型肝炎病毒概述1．1HCV的基本分子生物學(xué)特性丙型肝炎病毒(HCV)屬黃病毒科，為單股正鏈RNA病毒，球形，有包膜，全基因組大小約9379948Int。在3’末端有一個(gè)“多肽A尾巴”，核酸序列包含有由341個(gè)堿基組成的5’非翻譯區(qū)，一個(gè)含3011個(gè)氨基酸的多肽蛋白的巨大的開放讀碼框架(Openreadingframe，ORF)和由約27

3、個(gè)堿基組成的3’非翻譯區(qū)。ORF編碼一個(gè)大的前體蛋白，此蛋白可被宿主和病毒蛋白酶加工成結(jié)構(gòu)蛋白(Core、E1、E2和p7)和非結(jié)構(gòu)蛋白(NS2—5)。5’uTR區(qū)最為保守，核糖體進(jìn)入位點(diǎn)位于該區(qū)；而3’UTR對(duì)于HCVRNA復(fù)制是不可缺少的bJ。由于HCV的復(fù)制所依賴的RNA聚合酶缺乏3’-5’核酸外切酶校正功能，致使其基因組發(fā)生突變的頻率較高，從而更容易逃避機(jī)體的免疫識(shí)別或者抑制宿主，易發(fā)生突變MJ。1．2HCV的基因型及命名HCV基因組呈現(xiàn)高度異質(zhì)性，根據(jù)HCV基因組核苷酸序列的差異程度，可將HCV分為基因型(30％一35％)、基因亞型(20％一25％)、分離株(5％

4、一9％)和準(zhǔn)種(1％一5％)怕J，目前可分為6個(gè)基因型及不同亞型¨J。每種HCV基因型的開放讀碼框架(ORF)的長度存在著特異性的差別，HCV．1型中ORF長度約9400個(gè)核苷酸，HCV-2型中ORF長度是9099個(gè)核苷酸，HCV-3型長度是9063個(gè)核苷酸。2004年中國《丙型肝炎防治指南》指出舊1，HCVRNA基因分型有助于判定治療的難易程度及制定抗病毒治療的個(gè)體化方案。1994年根據(jù)來自全球范圍不同國家和地區(qū)從事HCV基因型研究的46位專家聯(lián)名倡議，推薦使用統(tǒng)一的Simmonds命名系統(tǒng)。按照2005年新達(dá)成的HCV基因型命名規(guī)則共識(shí)mJ，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示HCV基因型

5、，以小寫的英文字母表示基因的亞型(如la、2b、3c等)。2丙型肝炎病毒的基因型的檢測(cè)丙型肝炎病毒的基因型的檢測(cè)有很多種方法。直接測(cè)序法是采用特異性PCR引物擴(kuò)增部分病毒基因組區(qū)域，聯(lián)合多部位的測(cè)序結(jié)果進(jìn)而描繪系統(tǒng)進(jìn)化樹。其優(yōu)點(diǎn)是能夠區(qū)分所通訊作者：熊自忠，男。主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，E—mail：xiongzizhong@126．com有已知的亞型和描述新的變異，目前仍為一HCV基因分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但是操作繁瑣，成本較高，對(duì)混合感染不易確定。型特異性RT—PCR方法成本較低，不需要特殊設(shè)備，是通過對(duì)套式RT-PCR引物設(shè)計(jì)的優(yōu)化，使擴(kuò)增片斷大小不同，達(dá)到分型目的。此

6、方法可將6個(gè)基因型完全分開，并可以區(qū)分混合感染。缺點(diǎn)是有時(shí)會(huì)出現(xiàn)較弱的擴(kuò)增條帶，難以判斷。針對(duì)HCV基因分型方法的不足，各國學(xué)者都在通過不同角度改進(jìn)，新方法也不斷出現(xiàn)，如型特異性探針雜交法、基因芯片法、限制性片斷長度多態(tài)性(RFLR)法、熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針的解離曲線分析法、異源分子遷移率分析(HMA)法以及應(yīng)用人工合成的血清型特異性肽段經(jīng)酶免法檢測(cè)等。邱國華等¨1通過對(duì)限制性片斷長度多態(tài)性(RFLR)法方法的改進(jìn)，建立了ABC酶切三步法，適用于我國感染人群檢查，但不足是技術(shù)流程相對(duì)比較復(fù)雜。需要指出的是，上述各種方法所得結(jié)果會(huì)有一定差異。一些方法目前只是實(shí)驗(yàn)室方法，還沒有

7、商品試劑供應(yīng)。3丙型肝炎病毒的基因型的地理分布特征HCV基因型分布存在地理性差異。基因型la是第一個(gè)被鑒定的序列，多見于美國，基因型Ib廣泛分布于亞洲各國，同時(shí)在美國、歐洲、中國和13本的感染病例也較高?；蛐?a和2b占全球HCV基因型的10％一30％，遍布在北美、歐洲、中國和日本等地，而基因型2c僅在意大利北部發(fā)現(xiàn)?；蛐?在印度半島、東南亞和印度尼西亞較為突出，其中基因型3a特別在北歐、美國地區(qū)的藥物注射者中流行，通常混合感染基因型1a舊o。基因型4分布在非洲中北部和地中海東部國家(埃及、意大利)?；蛐?在