土壤消酸還原酶測定-ZQX

《土壤消酸還原酶測定-ZQX》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、土壤硝酸還原酶測定（專用）關(guān)松蔭酚二磺酸比色法—SunnyZhao1方法原理在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下，土壤中硝態(tài)氮可還原成氨。測定土壤中這些酶的活性可了解土壤氮素轉(zhuǎn)化中脫氨作用的強(qiáng)度。另外，硝酸還原酶還參與土壤中鐵的還原作用。土壤硝酸還原酶的活性測定方法的基本原理：硝酸鹽在硝酸還原酶、亞硝酸還原酶和羥氨還原酶的催化作用下轉(zhuǎn)化成氨，反應(yīng)前后硝態(tài)氮的變化反應(yīng)土壤硝酸還原酶的活性，硝態(tài)氮的變化可用酚二磺酸比色法測定。2試劑和材料2.1硝酸鉀溶液[pKNO3=1g/100ml]：10.0g分析純KNO3溶于

2、去離子水，稀釋至1L。2.2葡萄糖溶液[pC6H12O6=1g/100ml]：10.0g分析純葡萄糖溶于去離子水中，稀釋至1L。2.3CaCO32.4鋁鉀礬[AlK(S04)2]飽和溶液。參考：（即明礬，不過明礬帶12個(gè)結(jié)晶水，）明礬在20℃時(shí)溶解度是114g/L。2.5酚二磺酸溶液：取3g重蒸酚與20.1ml濃硫酸混合，在沸水浴中加熱回流6h。（若無發(fā)煙硫酸，可用苯酚25.0g，加濃硫酸225ml，沸水浴加熱6h配成。試劑冷后可能析出結(jié)晶，用時(shí)必須重新加熱溶解，但不可加水，試劑必須貯于密閉的玻璃棕色瓶中，嚴(yán)

3、防吸濕。）2.6NaOH溶液[p(NaOH)=10g/100ml]：50g分析純NaOH溶于去離子水，稀釋至500ml。2.7硝酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液[p（KNO3）=0.1mg/ml]：精準(zhǔn)稱取分析純KNO30.3258g溶于1L水中，（1L水中含有200mgNO3-N即為0.2mg/ml）。使用前將溶液稀釋至0.1mg/mlNO3-N。標(biāo)準(zhǔn)曲線：吸取50.00mlKNO3標(biāo)準(zhǔn)溶液于100ml三角瓶中，在沸水浴上蒸干（或者烘干），殘?jiān)?ml酚二磺酸溶液處理10min。加去離子水定容至500ml，其NO3-N濃度為0

4、.01mg/ml。從其中分別吸收0，1.00，3.00，5.00，7.00，9.00，11.00ml（對(duì)應(yīng)的濃度分別為：0.2*10-3mg/ml、0.6*10-3mg/ml、1*10-3mg/ml、1.4*10-3mg/ml、1.8*10-3mg/ml、2.2*10-3mg/ml）于50ml容量瓶中，用10%NaOH調(diào)至微黃色。定容后在于400~500nm進(jìn)行比色。樣品：酶促反應(yīng)后殘留下的NO3-N含量和土壤殘留NO3-N的含量設(shè)無土空白對(duì)照：用蒸餾水代替鮮土（基質(zhì)里面的NO3-N含量）。設(shè)有土無基質(zhì)（蒸餾

5、水代替）對(duì)照：不加基質(zhì)（硝酸鉀）。（土壤殘留NO3-N的含量）3主要儀器分光光度計(jì)，恒溫培養(yǎng)箱，100ml三角瓶，50ml容量瓶，瓷蒸發(fā)皿，水浴鍋。4測定步驟取1g新鮮土樣于100ml塑料瓶中，加20mgCaCO3和1mlKNO3溶液，混勻后加1ml葡萄糖溶液，另一種加入等量的蒸餾水代替底物（基質(zhì)）。蓋緊瓶塞（保證厭氧環(huán)境），輕搖塑料瓶（建議用100ml塑料瓶），置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，同時(shí)試劑作空白對(duì)照。培養(yǎng)結(jié)束后加入50ml去離子水和1ml鋁鉀礬溶液，靜置20min。混勻后過濾。（慢速定量7cm

6、濾紙）?！菊掖笠稽c(diǎn)的瓶子，分開做兩次】取20ml濾液于瓷蒸發(fā)皿（用錐形瓶中），在水浴中蒸干，加入2ml酚二磺酸溶液溶解處理10min，再加入15ml去離子水，用10%NaOH調(diào)至微黃色，最后移至50ml容量瓶中，定容后于400~500nm進(jìn)行比色。5計(jì)算結(jié)果C0（樣品溶液中NO3-N濃度含量的變化）=[C空-（C樣-C對(duì)）]指的是變化量。土壤硝酸還原酶的活性[mgNO3-N—N/g/24h(d)]=C0Vf/dwt式中：C空：無土空白吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得NO3-N含量。C樣：樣品吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得NO3-N

7、含量。C對(duì)：有土無基質(zhì)（硝酸鉀）吸光值由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得NO3-N含量(可以先不做)。V為待測液的體積（50ml）。f為分取倍數(shù)（50ml/20ml）。dwt為烘干土壤質(zhì)量。