毛細管電泳06

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1、CapillaryIso-ElectricFocusing(CIEF)毛細管等電聚焦等電點，pI正負電荷相等時對應的pH兩性離子細胞色素C10.6胰蛋白酶原9.2鯨肌紅蛋白7.6馬肌紅蛋白6.6Beta-乳球蛋白5.2轉鐵蛋白4.3pI＝7的蛋白質在不同pH處的荷電情況等電聚焦的原理具有一定pI的蛋白在電場中建立的pH梯度介質中，當所處位置的pH低于pI時帶正電荷，向負極移動；在高于pI的pH位置時帶負電，向正極移動；在等于pI處不動。不同等電點組分被聚焦在不同位置而達到聚焦和分離的目的。CapillaryIso-Ele

2、ctricFocusing-CIEF高分辨率（分辨率可達0.005pH）快速微量在柱檢測如何在電場方向上產生pH梯度？如何維持建立的pH梯度的穩(wěn)定？毛細管中pH梯度的建立CH2=CHCOOHCH2=CHNH2(CH2-CH)mNH2(CH2-CH)nCOOH丙烯酸乙烯氨聚兩性電解質兩性電解質的合成0+-pH/x陽極端(酸性電解質）陰極端（堿性電解質）兩性電解質的電荷與pH的關系0+-pH/x陽極端陰極端pI兩性電解質中的蛋白CIEF操作過程CIEF分辨能力取決于：擴散系數電場強度pH梯度淌度的pH梯度CIEF中的譜帶移動

3、正極移動：在正極加電解質如NaCl，使聚焦后分離的譜帶向該極移動負極移動：在負極，加電解質如NaCl，使聚焦后分離的譜帶向該極移動壓力移動，加電壓的同時施加壓力，實現(xiàn)移動的同時保持聚焦狀態(tài)掃描檢測分離譜帶，無需譜帶移動xpH陰極端陽極端陽極移動示意圖，陽極加入中性鹽xpH陰極端陽極端陰極移動示意圖，陰極加入中性鹽CIEF中加電加壓轉移方法CIEF分離蛋白混合物CIEFAnalysisofanti-CEAMAbCIEF測定等電點CIEF蛋白定量分析CIEF分析過程：載入，聚焦，遷移（檢測）CIEF試驗要點內壁經處理的毛細管

4、兩性電解質（～1％）和樣品充入毛細管電極液－20mM磷酸為陽極液，20mMNaOH為陰極液加電壓聚焦，4～6kV，聚焦穩(wěn)態(tài)后電流下降到起始的10～25％聚焦區(qū)帶的轉移和檢測操作注意事項濃縮沉淀：由于局部高度濃縮，有可能導致蛋白沉淀阻塞。需要加添加劑，如PVA等對蛋白質pI影響小的非離子表面活性劑。檢測：因為通常所用兩性電解質在低UV有吸收，因此UV檢測通常在較高波長，即280nm進行。比較CEIFCZE原理電解質等電點兩性電解質淌度緩沖溶液區(qū)帶寬度隨時間變窄隨時間變寬進樣方法混合在支持電解質中塞狀進樣區(qū)帶濃度被濃縮被稀釋

5、CIEF和CZE比較