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《（中文）共表達自殺基因聯(lián)合多細(xì)胞因子基因的膀胱腫瘤特異性真核表達載體的構(gòu)建和鑒定論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、空15》攻研究生學(xué)位論文共表達自殺基因聯(lián)合多細(xì)胞因子基因的膀胱論文題目（中文）腫瘤特異性真核表達載體的構(gòu)建和鑒定ConstructionandIdentificationofTissue論文題目（夕卜文）SpecificEukaryoticExpressionVectorforSuicideGeneCombinedwithCytokineGene研究生姓名鄒源學(xué)科、專業(yè)外科學(xué)?泌尿外科學(xué)研究方向泌尿系腫瘤學(xué)位級別碩士導(dǎo)師姓名、職稱田俊強副主任醫(yī)師論文工作起止年月2011年7月至2013年1月論文提交日期2013年3月論文答辯日期
2、2013年5月學(xué)位授予日期2013年6月校址：甘肅省蘭州市原創(chuàng)性聲明木人鄭重蘆明：木人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的成果。學(xué)位論文中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點等,均已明確注明出處。除文屮已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究成果做出重要貢獻的個人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。木蘆明的法律責(zé)任由木人承擔(dān)。論文作者簽名：□期：關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬蘭州大學(xué)。木人完全了解蘭州大學(xué)有
3、關(guān)保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保存或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電了版，允許論文被杳閱和借閱；木人授權(quán)蘭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用任何復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該論文宜接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為蘭州大學(xué)。木學(xué)位論文研究內(nèi)容：□可以公開□不宜公開，已在學(xué)位辦公室辦理保密中請，解密后適用本授權(quán)卩。（請在以上選項內(nèi)選擇其中一項打“V”）論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：F1期：FI期：英文縮寫索引縮略詞英文全稱中文全稱UPIIUro
4、plakinII尿路斑塊蛋1112HSV-TKHerpessimplexvirusthymidinekinase單純皰疹病毒胸腺激酶基因IL-2interleukin-2白細(xì)胞介素2TNF-atumornecrosisfactoralpha腫瘤壞死因子0TRAILTumorNecrosisFactor-relatedApoptosis-inducing刖嘯壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體PCRPolymeraseChainReaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)GCVGanciclovir更昔洛韋TCRFTcellgrowthfactorT細(xì)
5、胞生長因了DRdeathreceptor死亡受體DISCdeath-inducingsignalcomplex死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物DCdendriticcells樹突細(xì)胞MSCMesenchymalstemcells間質(zhì)干細(xì)胞SOEsplicingbyoverlapextension重證延伸拼接技術(shù)CTLcytotoxictlymphocyte細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞共表達自殺基因聯(lián)合多細(xì)胞因子基因的膀胱腫瘤特異性真核表達載體構(gòu)建及鑒定中文摘要目的：構(gòu)建五種具冇膀胱腫瘤特異性的雙啟動子重組真核表達載體，每種載體皆包含尿路斑塊蛋口2(Ur
6、oplakinII,UPII)啟動子控制的單純皰疹病毒胸腺激酶基因(herpessimplexvimsthymidinekinase,HSV-TK)>并分別搭配人白細(xì)胞介索2(interleukin-2,IL-2)腫瘤壞死因子a(tumornecrosisfactoralpha,TNF-a)、腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TumorNecrosisFactor-relatedApoptosis-inducing,TRAIL)、融合基因IL-2-TNF-a.融合基因IL-2-TRAILo方法：以實驗室保存的各種質(zhì)粒為模板通過常規(guī)聚
7、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PolymeraseChainReaction,PCR)分別擴增出UPII啟動子及HSV-TK基因、IL-2基因、TNFv基因、TRAIL基因。用重疊延伸拼接技術(shù)將IL-2分別與TNF-a>TRAIL融合為融合基因IL-2-TNF-a(IT)、IL-2-TRAIL(ITR)。以上PCR所得各基因片段分別連接到真核載體pMDIS-T并轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞TOP1OF中，搖菌并提取質(zhì)粒。質(zhì)粒經(jīng)PCR和酶切鑒定為陽性后進行測序，測序結(jié)果與基因序列同源比較，選取正確的質(zhì)粒進行載體的構(gòu)建。用分子生物學(xué)技術(shù)將雙啟動子真核表達載
8、體pBudCE4」的EF-la啟動子替換為UPII啟動子形成重組載體pBud-UPII/CMV,轉(zhuǎn)化至TOP1OF后搖菌并提取質(zhì)粒進行鑒定，鑒定表明替換成功后在UPII后克隆入TK基因形成新載體pBud-UPII-TK/CMV并鑒定。選取鑒定結(jié)果為陽性的質(zhì)粒并在
