微生物課件 病毒和亞病毒因子

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1、第三章病毒和亞病毒因子重要名詞1.烈性噬菌體：感染細(xì)胞后能在寄主細(xì)胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體稱為烈性噬菌體。2.噬菌斑形成單位（效價(jià)、感染中心數(shù)）：表示每ml樣品中所含有的具侵染性的噬菌體粒子數(shù)。3.朊病毒：又稱“普里昂”或蛋白侵染子，是一類不含核酸的傳染性蛋白質(zhì)分子，因能引起宿主體內(nèi)現(xiàn)成的同類蛋白質(zhì)分子發(fā)生與其相似的感應(yīng)性構(gòu)象變化，從而可使宿主致病。復(fù)習(xí)思考題1.什么是烈性噬菌體？試述其裂解性增值周期。烈性噬菌體：感染細(xì)胞后能在寄主細(xì)胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體稱為烈性噬菌體。①吸附噬菌體

2、尾絲散開，固著于特異性受點(diǎn)上。②侵入尾鞘收縮，尾管推出并插入到細(xì)胞壁和膜中，頭部的核酸注入到宿主細(xì)胞中，而蛋白質(zhì)衣殼留在細(xì)胞壁外。③增殖增殖過程包括核酸的復(fù)制和蛋白質(zhì)的生物合成。注入細(xì)胞的核酸操縱宿主細(xì)胞代謝機(jī)構(gòu)，以寄主個(gè)體及細(xì)胞降解物和培養(yǎng)基介質(zhì)為原料，大量復(fù)制噬菌體核酸，并合成蛋白質(zhì)外殼。④成熟（裝配）寄主細(xì)胞合成噬菌體殼體(T4噬菌體包括頭部、尾部),并組裝成完整的噬菌體粒子。⑤裂解（釋放）子代噬菌體成熟后，脂肪酶和溶菌酶促進(jìn)宿主細(xì)胞裂解，從而釋放出大量子代噬菌體。2.什么是效價(jià)，測(cè)定噬菌體效價(jià)的方法有幾種？（5種）最常用的是什么

3、方法（雙層平板法），其優(yōu)點(diǎn)如何？效價(jià)：每ml樣品中所含有的具侵染性的噬菌體粒子數(shù)。測(cè)定方法（5種）：斑點(diǎn)試驗(yàn)法、液體稀釋管法、單層平板法、雙層平板法、快速玻片法。雙層平板法：精確且常用。加了底層培養(yǎng)基后，可彌補(bǔ)培養(yǎng)基底部不平的缺陷；可使所有的噬菌斑都位于近乎同一平面上，因而大小一致、邊緣清晰且無重疊現(xiàn)象；又因上層培養(yǎng)基中的瓊脂較稀，故可形成形態(tài)較大、特征較明顯以及便于觀察和計(jì)數(shù)的噬菌斑。3.簡述用雙層瓊脂平板發(fā)測(cè)定噬菌體效價(jià)的基本原理和主要操作步驟?；驹恚涸谕坎加忻舾兴拗骷?xì)胞的固體培養(yǎng)基表面，若接種上相應(yīng)噬菌體的稀釋液，其中每一噬菌

4、體離子由于先侵染和裂解一個(gè)細(xì)胞，然后以此為中心，再反反復(fù)復(fù)侵染和裂解周圍大量的細(xì)胞，結(jié)果就會(huì)在菌苔上形成一個(gè)具有一定形狀、大小、邊緣和透明度的噬菌斑。主要操作步驟：預(yù)先分別配制含2%和1%瓊脂的底層培養(yǎng)基和上層培養(yǎng)基。先用底層培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿上澆一層平板，待凝固后，再把預(yù)先融化并冷卻到45℃以下，加有較濃的敏感宿主和一定體積待測(cè)噬菌體樣品的上層培養(yǎng)基，在試管中搖勻后，立即到在底層培養(yǎng)基上鋪平待凝，然后再37℃下保溫。一般經(jīng)10余小時(shí)后即可對(duì)噬菌斑計(jì)數(shù)。4.某微生物發(fā)酵廠發(fā)酵液和發(fā)酵狀態(tài)出現(xiàn)疑似感染有噬菌體的異常情況，試討論這些異?，F(xiàn)象有哪

5、些？并設(shè)計(jì)一個(gè)簡便易行的方法去證實(shí)之?，F(xiàn)象：（1）發(fā)酵周期明顯延長（2）碳源消耗緩慢（3）發(fā)酵液清淡（4）發(fā)酵產(chǎn)物形成緩慢或根本不形成（5）噬菌體檢測(cè)會(huì)發(fā)現(xiàn)大量噬菌斑（6）電鏡可見噬菌斑方法：噬菌體檢測(cè)會(huì)發(fā)現(xiàn)大量噬菌斑、電鏡可見噬菌體。5.病毒在基因工程中有何應(yīng)用？試對(duì)其在動(dòng)物、植物和微生物育種中的作用各舉一例，并加以簡單的說明點(diǎn)。在基因工程操作中，把外源目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并使之表達(dá)的中介體，稱為載體。除原核生物的質(zhì)粒外，病毒是最好的載體。（一）噬菌體作為原核生物基因工程的載體：E.coli的λ噬菌體是一種含線性dsDNA的溫和噬菌體

6、。在其基因組中，約有一半是對(duì)自身生命活動(dòng)十分必要的“必要基因”，另一半則是對(duì)自身生命活動(dòng)無重大影響的“非必要基因”，因此可被外源基因取代而建成良好的基因工程載體。（二）動(dòng)物DNA病毒作為動(dòng)物基因工程的載體SV40（猴病毒40），是一種寄生在猴細(xì)胞中的DNA病毒，能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌。其生活周期包括引起宿主細(xì)胞裂解和轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞兩個(gè)階段。SV—DNA是一個(gè)復(fù)制子，當(dāng)侵染其宿主細(xì)胞后，既能自我復(fù)制，也能整合在宿主的染色體上。（三）植物DNA病毒作為植物基因工程的載體花椰菜花葉病毒是一種由昆蟲傳播的侵染十字花科植物的病毒，含8kb的環(huán)狀dsDNA

7、，存在多種限制性內(nèi)切酶的切點(diǎn)。在其非必要基因區(qū)內(nèi)插入外源DNA后，所形成的重組體仍具侵染性。但由于它不能與宿主核染色體組發(fā)生整合，因此還無法獲得遺傳性穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因植株。第四章微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基重要名詞1.光能無機(jī)營養(yǎng)型：以光為能源，無機(jī)物為供氫體，CO2為基本碳源的微生物光能有機(jī)營養(yǎng)型：以光為能源，有機(jī)物為供氫體，CO2及簡單有機(jī)物為碳源的微生物化能有機(jī)營養(yǎng)型：以有機(jī)物為能源，有機(jī)物為供氫體，有機(jī)物為基本碳源的微生物化能無機(jī)營養(yǎng)型：有無機(jī)物為能源，無機(jī)物為供氫體，CO2為基本碳源的微生物2.單細(xì)胞蛋白：單細(xì)胞蛋白，也叫微生物蛋白，它是

8、用許多工農(nóng)業(yè)廢料及石油廢料人工培養(yǎng)的微生物菌體。3.鑒別性培養(yǎng)基：一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。4.伊