木瓜中多糖的提取、分離與鑒定【藥學(xué)畢業(yè)論文，絕對】

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1、藥學(xué)論文?木瓜中多糖的提取?分離與鑒定摘要：采取索氏抽提法、水提醇沉法、乙醇回流提取法、復(fù)合提取法從木瓜中提取多糖，經(jīng)過分離純化后，進(jìn)行IR鑒定。為木瓜多糖的工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：木瓜；多糖；提?。环蛛x；鑒定0前言多糖（polysacharidcs，PS），又稱多聚糖，是一種具有廣泛生物活性的大分子。從各種中草藥和其他植物中都可以提取分離出多糖，我國近年來對植物多糖，特別是具有中國特色的中草藥多糖的藥物活性已有廣泛報(bào)道。木瓜原名番木瓜，始載丁《名醫(yī)別錄》，屬薔薇科木瓜屬植物，是我國特有果木之一，主要生長在亞熱帶溫暖濕潤的山區(qū)地帶，是一種藥食同源的植物，性溫味酸。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明：

2、木瓜果實(shí)中含有豐富的糖分、番木瓜堿、木瓜蛋白嗨，并含有17種以上的氨基酸及多種微量元素。日前已有大量木瓜產(chǎn)品上市，如木瓜飲料、木瓜醋、木瓜奶、木瓜酒、木瓜干片、木瓜脯等，深受人們的喜愛。湖北建始縣盛產(chǎn)木瓜，但是創(chuàng)收的途徑主要是通過銷售鮮木瓜或干木瓜，其他相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)并不多見。從木瓜屮提取和分離鑒定具有保健和藥理活性的功能性成分，對于捉高木瓜的經(jīng)濟(jì)價(jià)値，解決目前農(nóng)民木瓜豐產(chǎn)不豐收、大量木瓜急待加工開發(fā)的問題具有積極的意義。本實(shí)驗(yàn)對木瓜中多糖進(jìn)行硏究，擬對其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對粗多糖進(jìn)行分離純化鑒定組成和結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步表征，為進(jìn)一步提高木瓜的附加値提供試驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1材料(1)原料：

3、湖北省建始縣干木瓜片,粉碎機(jī)粉碎(2)儀器：TDL-5-A臺式離心機(jī)，UV-7504紫外■可見分光光度計(jì)，SHZ?HI型循環(huán)水真空泵，紫外掃描儀，付立葉變換紅外光譜儀，Prostar高效液相色譜儀等。(3)試劑：石油醍(沸程60?90°C)，丙酮，乙醇(95%)，戊醇，三氯甲烷，氯化鈉，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，硫酸，鹽酸，苯酚，葡萄糖，乙瞇，三氟三氯乙烷，三氯醋酸，碘液，硫酸銅，酒右酸鉀鈉，D?半乳糖沖臭化鉀，碳酸領(lǐng)。1-2方法(1)多糖的測定：用苯酚■硫酸法對多糖測定。(2)多糖的提?。孩俨煌崛《嗵欠椒ǖ谋容^。分別用索氏抽提法，水提醇沉法，乙醇冋流提取法，復(fù)合提取法提取木瓜屮的多糖，并比較

4、多糖得率，選擇較好的水捉醇沉法進(jìn)行優(yōu)化處理。%1水提醇沉法提取多糖工藝的優(yōu)化單因素試驗(yàn)a溫度對提取率的影響：加水量為30ml，水提時(shí)間為30分鐘，分別在75°C、80°C、85°C、90°C、95°C的水浴條件下，捉取多糖，用苯酚?硫酸法測定其含量，b加水量對提取率的影響：水浴溫度為90°C，水提時(shí)問為30分鐘的條件下，改變加水量，提取多糖，并采用苯酚■硫酸法進(jìn)行測定，c水提時(shí)間對提取率的影響：水浴溫度為90°C，加水量為40ml的條件下，不同的水提吋間對多糖得率的影響，正交試驗(yàn)根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，選取合適的水平，對其進(jìn)行優(yōu)化處理。(1)多糖的分離、純化。%1蛋白質(zhì)的去除：分別用Sevage

5、法，三氟三氯乙烷法，三氯醋酸法去除樣品中的蛋白質(zhì)。%1低聚糖等小分子雜質(zhì)的去除：通過逆向流水透析除去低聚糖等小分子雜質(zhì)。%1多糖的柱層析純化：采用DEAE-52纖維素離子交換柱柱層析方法進(jìn)行。依次用0.5mol/L的NaOH、HC1和蒸館水處理塡柱材料至中性，反復(fù)處理三次后用蒸鎘水洗至中性，抽氣裝柱。用pH二7.6PBS溶液平衡48小時(shí)。稱取粗多糖1?0g，溶于少量蒸錨水中，離心除去不溶物，上清液過柱。用0.1-2.0mol/L的NaCl?PBS溶液梯度洗脫，控制流速為lml/min，采用部分收集器按5ml/tub收集。以苯酚?硫酸法測吸光値(490nm)作洗脫曲線，根據(jù)吸光値將I司一組分合并

6、。(4)多糖的鑒定。%1淀粉的碘反應(yīng):將純化后的得到的多糖配制成5%的溶液，滴加碘液().2ml，水浴加熱，觀察顏色是否有變化，同時(shí)做淀粉的對比試驗(yàn)。%1溶解性：稱取純化后的多糖0.5g，加入3ml的水，常溫下攪拌，觀察其溶解性。%1還原糖的測定：取0.1mg/ml的多糖溶液50ml于試管中，在80°C的恒溫水浴鍋中保溫30分鐘，吸取6ml，加入4m1的斐林試劑(等體積的斐林試劑A液和斐林試劑B液混合)，于590nm處比色。%1蛋白質(zhì)的測定：將純化得到的多糖在190-400nm處進(jìn)行UV掃描，觀察在250-280nm處沒有吸收峰，判斷是否有核酸和蛋白質(zhì)的存在°%1IR鑒定多糖中糖昔鍵的類型：將

7、多糖與漠化鉀烘干后，稱取多糖2mg與lOOmg的浪化鉀硏賂，壓片,置于紅外圖譜分析儀中作紅外分析。%1HPLC鑒定多糖中單糖的組成：用高效液相色譜法對木瓜多糖的單糖組成進(jìn)行定性鑒定。樣品的處理：稱取純化后的多糖lO.Omg，加lmol/L的硫酸2ml，充N2后于100C水浴加熱5h，用BaC03中和，膜過濾后作為待測樣品。標(biāo)準(zhǔn)液的配制：稱取葡萄糖、半乳糖25mg，分別溶于5m1的蒸錨水中，配成5m