木瓜中多糖的提取、分離與鑒定

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1、木瓜中多糖的提取、分離與鑒定　　摘要：采取索氏抽提法、水提醇沉法、乙醇回流提取法、復(fù)合提取法從木瓜中提取多糖，經(jīng)過分離純化后，進行IR鑒定。為木瓜多糖的工業(yè)化生產(chǎn)提供了一定的理論依據(jù)?！　￡P(guān)鍵詞：木瓜；多糖；提取；分離；鑒定　　　　0前言　　　　多糖（polysacharides，PS），又稱多聚糖，是一種具有廣泛生物活性的大分子。從各種中草藥和其他植物中都可以提取分離出多糖，我國近年來對植物多糖，特別是具有中國特色的中草藥多糖的藥物活性已有廣泛報道。　　木瓜原名番木瓜，始載于《名醫(yī)別錄》，屬薔薇科木瓜屬植物

2、，是我國特有果木之一，主要生長在亞熱帶溫暖濕潤的山區(qū)地帶，是一種藥食同源的植物，性溫味酸。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明：木瓜果實中含有豐富的糖分、番木瓜堿、木瓜蛋白酶，并含有17種以上的氨基酸及多種微量元素。目前已有大量木瓜產(chǎn)品上市，如木瓜飲料、木瓜醋、木瓜奶、木瓜酒、木瓜干片、木瓜脯等，深受人們的喜愛?！　『苯ㄊ伎h盛產(chǎn)木瓜，但是創(chuàng)收的途徑主要是通過銷售鮮木瓜或干木瓜，其他相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)并不多見。從木瓜中提取和分離鑒定具有保健和藥理活性的功能性成分，對于提高木瓜的經(jīng)濟價值，解決目前農(nóng)民木瓜豐產(chǎn)不豐收、大量木瓜急待加工開發(fā)的

3、問題具有積極的意義。　　本實驗對木瓜中多糖進行研究，擬對其提取工藝進行優(yōu)化，并對粗多糖進行分離純化鑒定組成和結(jié)構(gòu)進行初步表征，為進一步提高木瓜的附加值提供試驗依據(jù)。　　　　1材料與方法　　　　1.1材料　?。?）原料：湖北省建始縣干木瓜片，粉碎機粉碎　　（2）儀器：TDL-5-A臺式離心機，UV-7504紫外-可見分光光度計，SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵，紫外掃描儀，付立葉變換紅外光譜儀，Prostar高效液相色譜儀等。　?。?）試劑：石油醚（沸程60-90℃），丙酮，乙醇（95%），戊醇，三氯甲烷，氯化鈉，磷酸

4、二氫鈉，磷酸氫二鈉，硫酸，鹽酸，苯酚，葡萄糖，乙醚，三氟三氯乙烷，三氯醋酸，碘液，硫酸銅，酒石酸鉀鈉，D-半乳糖，溴化鉀，碳酸鋇。　　　　1．2方法　?。?）多糖的測定：用苯酚-硫酸法對多糖測定?！　。?）多糖的提取：①不同提取多糖方法的比較。分別用索氏抽提法，水提醇沉法，乙醇回流提取法，復(fù)合提取法提取木瓜中的多糖，并比較多糖得率，選擇較好的水提醇沉法進行優(yōu)化處理。　?、谒岽汲练ㄌ崛《嗵枪に嚨膬?yōu)化　　單因素試驗　　a溫度對提取率的影響：加水量為30ml，水提時間為30分鐘，分別在75℃、80℃、85℃、90

5、℃、95℃的水浴條件下，提取多糖，用苯酚-硫酸法測定其含量，　　b加水量對提取率的影響：水浴溫度為90℃，水提時間為30分鐘的條件下，改變加水量，提取多糖，并采用苯酚-硫酸法進行測定，　　c水提時間對提取率的影響：水浴溫度為90℃，加水量為40ml的條件下，不同的水提時間對多糖得率的影響，　　正交試驗　　根據(jù)單因素實驗的結(jié)果，選取合適的水平，對其進行優(yōu)化處理?！　　　。?）多糖的分離、純化?！　、俚鞍踪|(zhì)的去除：分別用Sevage法，三氟三氯乙烷法，三氯醋酸法去除樣品中的蛋白質(zhì)?！　、诘途厶堑刃》肿与s質(zhì)的去除：

6、通過逆向流水透析除去低聚糖等小分子雜質(zhì)?！　、鄱嗵堑闹鶎游黾兓翰捎肈EAE-52纖維素離子交換柱柱層析方法進行?！　∫来斡?.5mol／L的NaOH、HCl和蒸餾水處理填柱材料至中性，反復(fù)處理三次后用蒸餾水洗至中性，抽氣裝柱。用pH=7.6PBS溶液平衡48小時。稱取粗多糖1.0g，溶于少量蒸餾水中，離心除去不溶物，上清液過柱。用0.1-2.0mol／L的NaCl-PBS溶液梯度洗脫，控制流速為1ml／min，采用部分收集器按5ml／tub收集。以苯酚-硫酸法測吸光值（490nm）作洗脫曲線，根據(jù)吸光值將同

7、一組分合并?！　。?）多糖的鑒定?！　、俚矸鄣牡夥磻?yīng)：將純化后的得到的多糖配制成5%的溶液，滴加碘液0.2ml，水浴加熱，觀察顏色是否有變化，同時做淀粉的對比試驗?！　、谌芙庑裕悍Q取純化后的多糖0.5g，加入3ml的水，常溫下攪拌，觀察其溶解性。　?、圻€原糖的測定：取0.1mg／ml的多糖溶液50ml于試管中，在80℃的恒溫水浴鍋中保溫30分鐘，吸取6ml，加入4ml的斐林試劑（等體積的斐林試劑A液和斐林試劑B液混合），于590nm處比色?！　、艿鞍踪|(zhì)的測定：將純化得到的多糖在190-400nm處進行UV掃描

8、，觀察在250-280nm處沒有吸收峰，判斷是否有核酸和蛋白質(zhì)的存在?！　、軮R鑒定多糖中糖苷鍵的類型：將多糖與溴化鉀烘干后，稱取多糖2mg與100mg的溴化鉀研磨，壓片，置于紅外圖譜分析儀中作紅外分析?！　、轍PLC鑒定多糖中單糖的組成：用高效液相色譜法對木瓜多糖的單糖組成進行定性鑒定。　　樣品的處理：稱取純化后的多糖10.0mg，加1mol／L的硫酸2ml，充N2后于100℃水浴加熱5h，用Ba