血清學(xué)反應(yīng)ppt課件.ppt

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1、第九章血清學(xué)反應(yīng)一血清學(xué)反應(yīng)的概念及一般特點(diǎn)抗原及相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外均能發(fā)生特異性結(jié)合，在體外結(jié)合能發(fā)生可見免疫反應(yīng)。由于抗體主要存在于血清中，故稱為血清學(xué)反應(yīng)。血清學(xué)反應(yīng)根據(jù)抗原性質(zhì)、反應(yīng)條件、參與反應(yīng)物質(zhì)，則表現(xiàn)出反應(yīng)有多種多樣。其反應(yīng)的一般特點(diǎn)是：第一節(jié)概述9/4/20212（一）特異性和交叉性血清學(xué)反應(yīng)具有高度特異性?？乖荒芘c相應(yīng)抗體結(jié)合，而不能與其他抗體相結(jié)合。生物體的組成是復(fù)雜的，包含有多種抗原成分，在進(jìn)化過程中形成不同的種類，有各不相同的特異性抗原，在親緣種系中往往含有部分相同的抗原成分，能引起交叉反應(yīng)。9/4/20213（二）結(jié)合的可逆性抗原抗體結(jié)合

2、是分子表面結(jié)合，這一結(jié)合受理化因素的影響，當(dāng)溫度超過60?C或pH降至3以下時(shí)，則抗原抗體復(fù)合物又重新離群。離群后的抗原、抗體，其理化性質(zhì)、免疫活性保留。9/4/20214（三）最適比與帶現(xiàn)象抗原與抗體結(jié)合，其比例適當(dāng)時(shí)才可出現(xiàn)可見反應(yīng)。比例最適合，出現(xiàn)反應(yīng)最快，反應(yīng)產(chǎn)物愈多。如果抗原或抗體過多，抗體和抗原結(jié)合點(diǎn)的聚合一開始時(shí)即達(dá)到飽和，形成小的復(fù)合物則不能繼續(xù)與相鄰抗原、抗體結(jié)合，不出現(xiàn)可見反應(yīng)，謂之區(qū)帶現(xiàn)象或帶現(xiàn)象。為了避免血清學(xué)反應(yīng)的帶現(xiàn)象，需要將抗原或抗體作適當(dāng)?shù)南♂尅?/4/202159/4/20216比例不適合—不能完成第二步反應(yīng)—帶現(xiàn)象9/4/20217（四

3、）反應(yīng)的階段性抗原與抗體進(jìn)行結(jié)合，可分為兩個(gè)階段：第一階段為抗原與抗體的特異性結(jié)合階段，反應(yīng)快，幾秒鐘至幾分鐘即完成，但無可見反應(yīng)；第二階段為抗原與抗體的反應(yīng)可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合等，反應(yīng)進(jìn)行較慢，需幾分鐘或更久。第二階段受電解質(zhì)、溫度、pH值等影響。兩個(gè)階段在反應(yīng)進(jìn)行中無嚴(yán)格界限。9/4/20218（五）影響反應(yīng)的因素1.電解質(zhì)血清學(xué)反應(yīng)須在適當(dāng)濃度的電解質(zhì)參與下，才出現(xiàn)可見反應(yīng)。在凝集、沉淀反應(yīng)操作時(shí)，一般用生理鹽水或8%—10%高滲鹽水作稀釋，才出現(xiàn)較強(qiáng)反應(yīng)。9/4/202192.溫度溫度升高，可增加抗原與抗體分子運(yùn)動(dòng)而碰撞接觸，加速反應(yīng)的出現(xiàn)，故通常

4、將抗原抗體混合后，放置37?C溫箱或水浴箱中，保持一定時(shí)間，促進(jìn)反應(yīng)。溫度高，加速反應(yīng)；溫度低，反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，但反應(yīng)結(jié)合充分，故在補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、免疫吸附實(shí)驗(yàn)中，采用低溫放置過夜。9/4/2021103.酸堿度血清學(xué)反應(yīng)通常用pH6～8，過酸或過堿都可使復(fù)合物離群，pH值在等電點(diǎn)時(shí)，可引起非特異凝集。9/4/202111二血清學(xué)反應(yīng)的類型沉淀、凝集、瓊脂擴(kuò)散、中和、補(bǔ)體結(jié)合和免疫吸附試驗(yàn)等。9/4/202112三血清學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用方式和目的抗原抗體反應(yīng)是特異性的，在應(yīng)用時(shí)必須有一個(gè)是已知的，通過反應(yīng)來鑒定另一個(gè)未知的。例如鑒定某一病原微生物時(shí)，多用已知抗體。診斷傳染病時(shí)，對(duì)慢

5、性病可用已知的抗原檢測(cè)未知的特異性抗體；診斷急性病則用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原（病原），如炭疽病等。9/4/202113（一）抗原與抗體的快速檢測(cè)在診斷傳染病、寄生蟲病、變態(tài)反應(yīng)、腫瘤、自身免疫疾病時(shí)，均已廣泛應(yīng)用血清學(xué)方法檢查抗體或抗原（細(xì)菌、病毒）的存在，作為診斷疾病的手段?，F(xiàn)已應(yīng)用的間接血凝技術(shù)、對(duì)流電泳、標(biāo)記抗體技術(shù)，均能快速、簡(jiǎn)便的確診抗原或抗體。9/4/202114（二）生物活性物質(zhì)的超微定量應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、放射免疫等技術(shù)，抗原抗體檢測(cè)的敏感度均大為提高，已達(dá)到能精確測(cè)出Pg的水平，其敏感度已大大超過了常規(guī)的化學(xué)分析。此類技術(shù)已應(yīng)用于測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)的激素、

6、維生素、藥物及其他病理過程中的微量產(chǎn)物。9/4/202115（三）抗原或抗體在細(xì)胞與亞細(xì)胞水平的定位用熒光抗體、酶標(biāo)抗體技術(shù)，可以檢測(cè)病毒或細(xì)菌在動(dòng)物各種組織細(xì)胞中的分布。應(yīng)用免疫酶組化法及鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行免疫電鏡觀察，可以測(cè)定病毒在亞細(xì)胞水平的定位，也可測(cè)定淋巴細(xì)胞表面免疫球蛋白及抗體的產(chǎn)生情況。據(jù)此可分析傳染病發(fā)生的機(jī)制及對(duì)免疫機(jī)理的探討。9/4/202116（四）微生物的鑒定與分析應(yīng)用交叉凝集實(shí)驗(yàn)、凝集吸收實(shí)驗(yàn)、沉淀實(shí)驗(yàn)等血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行微生物的鑒定及區(qū)別微生物的血清型，從而確定微生物的類型及其親緣關(guān)系。還可應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)、免疫電泳等技術(shù)，對(duì)微生物的抗原組分進(jìn)行

7、分析。9/4/202117（五）血型鑒定用細(xì)胞直接凝集實(shí)驗(yàn)、血凝抑制實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)等技術(shù)，可作血型鑒定、親子關(guān)系的確定、新生兒和出生幼畜溶血病的診斷。9/4/202118第二節(jié)沉淀試驗(yàn)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的絮狀白色沉淀，稱之為沉淀試驗(yàn)（Precipitationreactiontest）。可溶性抗原+免疫血清出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象(血清蛋白、病毒)（抗體）比例適合沉淀原沉淀素比例不適合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象0.85%NaCl9/4/202119一液相沉淀試驗(yàn)1．環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：試管內(nèi)，下層沉淀素與上層沉淀