干巴菌及松乳菇分離物的分子鑒定和優(yōu)化培養(yǎng).pdf

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1、Ｖ■分類號０９３密級公開ＵＤＣ編號《＊若Ａ聲巧女研《４《化訟Ａ題目平田葡及化現(xiàn)黨分寓物的分子鑒定巧優(yōu)化培養(yǎng)ＴｉｔｌｅＭｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎ村ｆｋａ村ｏｎａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＴｈｅｌｅｖｈｏｒａｓａｎｂａｉｕｎ’ａｎｄＺａｃ化／７ＭＳ沁／ＺｃＺｏｓＭｓｉｓｏｌａ化ｓ學(xué)院（所、中心）生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)名稱微生物學(xué)祝巧牛姓備王康康學(xué)號１２０１３０００８８８導(dǎo)師姓名沙藻職稱副研究員

2、＿－導(dǎo)師姓名張亞平、院±＿＿＿＿職稱教授２０１６年５月？－，、論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)本論文是作者在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的研究成果。餘了文中特別加Ｗ標注和致謝，的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果不存在割竊或抄襲行為一。與作者同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。現(xiàn)就論文的使用對云南大學(xué)授權(quán)如下：學(xué)校有權(quán)保留本論文（含電子版），也可Ｗ采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文；學(xué)校有權(quán)公布論文的全部或部分內(nèi)容，可Ｗ將論

3、文用于查闊或借閱服務(wù)送義學(xué)位論文用；學(xué)校有權(quán)向有關(guān)機構(gòu)于學(xué)術(shù)規(guī)范審查、社會監(jiān)督或評獎；學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容錄入有關(guān)數(shù)據(jù)庫用于檢索服務(wù)。（內(nèi)部或保密的論文在解密后應(yīng)遵循比規(guī)定）蘭研究生簽名－：＾樂旅導(dǎo)師簽名：巧念日期；叫云南大學(xué)碩±學(xué)位論文摘要７７口ｎ６ｗＺａｎ）（ｒＡｏｒａ），干己菌（ｚｅ／ｅ如ｏｒａ各ｑ／ｚｇ在分類學(xué)上隸屬革菌屬＆ｅ／巧’‘一種外生菌根真菌ｃｔｏｎｗ成化是云南省特有的。松乳茹（Ｉｆｌ７ｏｓｗ）是乳茹屬一（ＺａｃｔｅＷｗ）的種外生菌根真菌。兩

4、者均可與云南松共生，但干己菌的分布范圍更狹窄，所Ｗ對其的研究較少。松乳茹與干己菌生長環(huán)境類似且有關(guān)研究較多，對干Ｅ菌的研究具有參考價值。由于至今沒有成熟的人工技術(shù)可Ｗ控制子實體的產(chǎn)生，與市面上熟知的腐生食用菌，例如靈芝、金針茹，不能人工條、木耳等完全不同件下依靠精確的溫度、濕度、營養(yǎng)條件進行全年生產(chǎn)，只能完全依賴野生采集。特別是干己菌在自然條件下發(fā)生率比其他菌根真菌低，所＾心產(chǎn)量更低。由于從菌根組織或子實體中分離菌根真菌困難重重，且很多菌根真菌在人工培養(yǎng)基上生長緩慢或無法生長，因此可

5、食用菌根菌的菌種分離鑒定、優(yōu)化培養(yǎng)是目前該研究領(lǐng)域比較緊迫的任務(wù)。本研究的目的是通過優(yōu)化分離方法，、松乳茹純培養(yǎng)菌絲體獲得干己菌；通過單因子試驗和正交試驗探究分離自云南省玉溪市及昆明市小哨鄉(xiāng)的干己菌分離物的最適營養(yǎng)條件及ｐＨ值，，通過對比有關(guān)文獻中松乳茹培養(yǎng)基的優(yōu)化結(jié)果得到松乳覺分離物的適宜培養(yǎng)條件，盡量縮短培養(yǎng)時間，獲得大量菌絲體Ｗ備接種之用；比較兩個干己苗菌種在生理特性及不同基因片段序列上的區(qū)別；進行菌根合成試驗。主要研究結(jié)果如下：一Ｌ通過組織分離法獲得了松乳茹純培養(yǎng)物一，建立了

6、種新的分離法空氣傳導(dǎo)分離法Ｗ獲得干己菌純培養(yǎng)物。２．小哨鄉(xiāng)的干己菌分離物的最適培養(yǎng)條件為葡萄糖２０ｇ，蛋白腺２ｇ，酵母提?。崳娢铮玻纾蛩徭?zhèn)０．５ｇ，磯酸二氨鐘０．５ｇ，初始ｐＨ５．５，水忙；來自玉溪的干己菌分離物最適培養(yǎng)基為葡萄糖２０ｇ，硫酸較４ｇ，酵母提取物２ｇ，硫酸鎮(zhèn)０．５ｇ，憐酸二０．５Ｈ化ｌＯ氨鐘ｇ，初始ｐ５．５，水；松乳茹分離物的最適培養(yǎng)條件為葡萄糖ｇ，蛋白腺４ｇ，酵母提取物２ｇ，硫酸鎮(zhèn)］ｇ，憐酸二氨巧Ｉｇ，ＰＤＡ培養(yǎng)基１Ｌ。３．ＷｒＲＮＡＩＴＳ序列作為標記基因，對二個分離物進行

7、了分子鑒定，確定分離１云南大學(xué)碩±學(xué)位論文物分別為干己菌和松乳茹的苗絲體。干己苗兩個菌種在ＩＴＳ基因片段上堿基序列無差異；１２ｓＲＮＡ基因片段上堿基序列有Ｉ個位點的差異；１６ｓＲＮＡ基因片段上堿基序列有２個位點的差異：ＴＵＢ基因片段上堿基序列有１個位點的差異。４．菌根合成得到分別帶有干己菌及松乳茹菌根的云南松松苗。關(guān)鍵詞：ＩＴＳ序列鑒定生菌根真菌干己斬純培養(yǎng)；：外；菌根合成ｎ玄南大學(xué)碩±學(xué)位論文Ａｂｓｔｒａｃｔ．ＴＴｅ／ｅ／ｒａＷＭａｓｅｃｉ＾ｉｅｓｋｎ

8、ｄｏｆＥＣＭｆｔｉｎｉＩ口ＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｉｓａｐｚｏ各幻ｗＡ巧，ｐｇ，ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｆｔｉ打ｇｕｓｏｆｔｈｅＴＴｚｅ／ｅｐ＆ｏｒ幻ｆａｍｉｌｙ．Ｚ）￡／／ｃ／０ｓ化ｙｉｓａｌｓｏＥＣＭｆｉｉｎｇｉ（Ｌａｃｔａｒｉｕｓ）．Ｂｏｔｈｏｆｔｈｅｍｃａｎｓｙｍｂｉｏｓｅｗｉｔｈ