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1、野生松乳菇菌絲在不同培養(yǎng)基上的分離試驗 摘要以野生松乳菇的子實體作為分離材料,取子實體的柄基進行組織分離,分別接入不同配方的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)試驗,結果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O0.5g、瓊脂20g、松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾)、腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),加水至1000mL的培養(yǎng)基上菌絲生長最好。 關鍵詞松乳菇;培養(yǎng)基;菌絲生長 松乳菇(Lactariusdeliciosus),別名松菇,其質脆味美,營養(yǎng)豐富,深受人們喜愛,每年5~6月和10~11月有松乳菇上市,商品價值較高。近年來,野生松
2、乳菇產量逐年下降,人工開發(fā)已成發(fā)展趨勢[1-6]。通過對野生松乳菇子實體進行分離,篩選出適合菌絲生長的培養(yǎng)基,以期為開發(fā)利用松乳菇奠定基礎?！ ?材料與方法 1.1試驗材料 野生菌株采自江西省吉安縣鳳凰鎮(zhèn)松樹林中,采摘朵形正常、生長健壯、內菌幕剛破、無蟲害、成熟的新鮮子實體。 1.2試驗方法 1.2.1母種培養(yǎng)基的配制。配方:①葡萄糖20g,酵母1g,MgSO4·7H2O0.5g,瓊脂20g,松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾),腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1000mL。②腐殖土液200mL(200g腐殖土
3、+1000mL水煮沸過濾);青松針液200mL(300g青松針+1000mL水煮沸過濾),松根液200mL(300g松根+1000mL水者沸過濾);啤酒糟200mL(200g干啤酒糟+1000mL水煮沸過濾);葉酸0.01g;瓊脂20g;水加至1000mL。③除未加入葉酸0.01g,其他配方同②。④去皮馬鈴薯200g(切薄片加水1000mL煮沸過濾),葡萄糖20g,瓊脂20g,水加至1000mL。將以上4種配方分別裝入15mm試管,每支10mL,每組100支,于121℃下滅菌30min,冷卻做成斜面培養(yǎng)基?！ ?.2.2組織分離。將子實體反復沖洗干凈,取柄基用酒精處理表面,在無
4、菌條件下取中間部分切成小薄片,用接種針接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內,在恒溫25℃下進行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每天檢查1次,將污染的試管揀出?！ ?.2.3孢子分離。將一菌蓋厚實、菌柄粗壯、外觀光潔、無病蟲危害的野生松乳菇切除柄基,反復沖洗,用干紗布吸去表面水分后,噴灑75%酒精進行消毒,再用自來水反復沖洗,用紗布擦干,放在消好毒的玻璃鐘罩內進行孢子收集。獲得孢子后,用蒸餾水稀釋,用滴管接入不同的培養(yǎng)基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內,在恒溫25℃下進行培養(yǎng),3d后觀察菌絲萌發(fā)生長情況,每
5、天檢查1次?！ ?.2.4原母種擴大再生母種。將分離獲得的純菌絲體分別接入上述培養(yǎng)基斜面上,每種培養(yǎng)基各接10支試管,置于25℃下培養(yǎng),3d后每天觀察1次?！ ?結果與分析 2.1不同培養(yǎng)基的分離效果 組織分離除培養(yǎng)基③、④外,培養(yǎng)基①、②均獲得了菌絲純培養(yǎng)物,但在不同的培養(yǎng)基上組織分離的成功率不一致。菌絲長勢因培養(yǎng)基不同而異,培養(yǎng)基①菌絲淺灰色,濃密,絨毛狀生長;培養(yǎng)基②菌絲淺灰色,較疏,匍匐生長。孢子分離因污染未獲成功。培養(yǎng)①比較適合用于松乳菇組織分離,分離的菌絲較粗而濃密,成功率為40%;培養(yǎng)基②上菌絲分離成功率高達60%,但菌絲體纖細而稀疏(見表1)?！ ?.2
6、母種轉接培養(yǎng)觀察 接入培養(yǎng)基①、②、③、④上的菌絲體均能生長。以培養(yǎng)基①、④上的菌絲生長較好,菌絲體呈淺灰白色,較粗而濃密,放射型絨毛生長;培養(yǎng)基③上的菌絲體長到第4天全部停止生長,未長滿斜面;培養(yǎng)基②上的菌絲體生長速度快,比①、④培養(yǎng)基提早1.5d長滿斜面,但菌絲體稀而細。 3結論 試驗結果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O0.5g、瓊脂20g、松根液100mL(100g松根+500mL水煮沸過濾)、腐殖土水100mL(100g腐殖土+500mL水煮沸過濾),水加至1000mL的培養(yǎng)基上松乳菇菌絲生長最好?！ ? [1]施秀娟,孫東明,邱韓
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