大腸桿菌O157H7鞭毛蛋白和溶菌酶抑制劑蛋白的抗原表位驗(yàn)證Verification of antigenic epitopes of flagellin and lysozyme inhibitor proteins from Escherichia coli O157H7.pdf

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1、碩女學(xué)位論文大腸桿菌０１５７：Ｈ７鞭毛蛋白和溶菌酶抑制劑蛋白的抗原表位驗(yàn)證義，誦林敏玲爲(wèi)＊巧乂學(xué)二〇—六年六月．Ｖ．１？．？．，Ｓ分類號(hào)％５２．４密級(jí)公開ＵＤＣ６％．０９碩±學(xué)位論文大腸巧茵０１５７；Ｈ７鞭毛蛋白和溶茵酶抑制劑蛋白的抗原表位驗(yàn)證林敏務(wù)學(xué)科專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師規(guī)庭俊教授論文答辯日期２０１６年５月２８日學(xué)位授予日期２０１６年６月３０日答辯委員會(huì)主席梁萬文研究員廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文，是本人

2、在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除己特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫的研巧成果，也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料一。與我同工作的同事對(duì)本論文的研巧工作所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬?gòu)V西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán)，即：學(xué)校有權(quán)保存并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)

3、數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可Ｗ采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于：□保密，在年解密后適用授權(quán)。Ｂ不保密。請(qǐng)?jiān)冢ⅲⅲ咨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打Ｖ（）論文作者簽名：棘盛政日期：指導(dǎo)教師簽名：日期，４．名作者聯(lián)系電話：電子郵箱：大腸桿菌０：Ｈ７１５７鞭毛蛋白和溶菌酶抑制劑蛋白的抗原表位驗(yàn)證摘要一腸出血大腸桿菌０１５７：Ｈ７是種可由食品和水源傳播的致病性強(qiáng)的人畜共患傳染病原體，從首次分離來，世界各地出現(xiàn)不同規(guī)模的暴發(fā)及散，。腸出血大發(fā)流行，造成養(yǎng)殖業(yè)重大經(jīng)濟(jì)損失并時(shí)刻威脅著

4、人類的健康腸桿菌０１５７：Ｈ７由于感染程度不同，可導(dǎo)致患者血性腹瀉、出血性結(jié)腸炎、溶血性尿毒癥及血栓性血小板減少性紫薇，甚至死亡。世界衛(wèi)生組織己將其與艾滋病、埃博拉出血熱列為新興傳染病。鞭毛蛋白（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ，Ｆ艙）和溶菌酶抑制劑（Ｌｙｓｏｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ／＼）都已被證實(shí)是腸出血大腸桿菌，＾０１５７Ｈ７初３。：期枯附和定植的重要毒力因子本研究首先分析鞭毛蛋白和溶菌酶抑制劑的氨基酸二級(jí)結(jié)構(gòu)、親水性、柔初性、，、抗原性表面性等信息綜合考慮篩選出潛在的細(xì)胞抗原表位化－：段，并且通過生物合成法合成得到高

5、純度片段則Ｃ３３８３４９－４７－ＫＡＡＳＥＧＳＤＧＡＳＬ、Ｆｌｉｃ４６０１ＡＴＤＴＮＫＤＹＡＰＡＩ、Ｉｖｙ１４６１５７ＳＬＥＮＨＰＤ畑師Ｋ。通過乳化多化免疫小鼠得到多克隆抗體，運(yùn)用化ＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、間接免疫英光試驗(yàn)驗(yàn)證多克隆抗體的滴度、反應(yīng)性、特異性。－－－－經(jīng)過蘭次免疫后ＥＬＩＳＡ測(cè)得ＡｎｔｉＦｌｉｃ３３８３４９、Ａｎｔｉ即Ｃ４６０４７１、Ａｎｔ－－－ｉＩｖｙｌ４６１５７、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７多克隆抗體效價(jià)分別為１：１６００、１：６４００、１：６４００、１：１２８００，

6、結(jié)果表明多克隆抗體具有較高效價(jià)。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ證實(shí)制備的多克隆抗體可只別天然蛋白，存在較高特異性；間接免疫焚Ｉ－－Ａｎｔｉ－Ｆ４９、Ａｎｔｉ－４７Ｈ光試驗(yàn)結(jié)果顯示出ｌｉｃ３３８３Ｆｌｉｃ４６０１在ｅｌａ細(xì)胞外圍有綠－－Ａｎｔ－Ｉ５７ｔ色焚光ｉｖｙｌ４６１ｅｌａｉＥＨＥＣ；在Ｈ細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中強(qiáng)烈的綠色巧光；Ａｎ＇－５７Ｈｅ－０１：Ｈ７在ｌａ細(xì)胞胞質(zhì)與夕圍均顯示綠色巧光；ＡｎｔｉＦｌｉｃ３３８３４９、［－Ａｎｔ－－－－ｉＦｌｉｃ４６０４７１、ＡｎｔｉＩｖｙｌ４６１５７、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７的羨光強(qiáng)度值是正

7、２？＜０常對(duì)照組的４倍，與正常對(duì)照存在顯著差異（．０５）；說明多克隆抗體ｐ的反應(yīng)性良好。－－Ｆ－－抗體阻斷抑制試驗(yàn)首先將Ａｎｔｉｌｉｄ３８３４９、ＡｎｔｉＦｌｉｃ４６０４７１、－－Ｉ５７－Ｈ７Ａｎｔｉｖｙｌ４６１、ＡｎｔｉＥＨＥＣ０１５７：多克隆抗體與大腸桿菌０１５７：Ｈ７預(yù)處理后，大腸桿菌０１５７：Ｈ７粘附Ｈｅｌａ細(xì)胞的能力減弱或喪失，焚光強(qiáng)度比？無預(yù)處理的降低２３倍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明多克隆抗體可Ｗ與大腸桿５７Ｈ７１５７Ｈ７對(duì)Ｈｅｌａ菌０１：天然的蛋白結(jié)合，在體外成功阻斷大腸桿菌０：細(xì)胞的粘附

8、。７天ＸＦＵ多膚免疫后攻毒半數(shù)致死量（２．８１１０化）的大腸桿菌０１５７：Ｈ７，７天－ｉｃ攻毒后免疫組和攻毒組都在排茜，但攻毒第７天Ｆｌ３３８３４９組、Ｆ－Ｉ－５