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1、Genistein對(duì)Ap所致癡呆大鼠工作記憶的影響及機(jī)制探討Genistei仃對(duì)Ap所致癡呆大鼠工作記憶的影響及機(jī)制探討原麗1郭小姝1解瑞2劉曉杰1李清山1劉燕1張翠英1L山西長治醫(yī)學(xué)院生理教研室，山西長治046000;2?長治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院眼科，山西長治046000[摘要]目的比較不同濃度染料木黃酮Genistein對(duì)癡呆模型大鼠認(rèn)知功能的影響，并探討可能的分子機(jī)制。方法50只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、DMSO組、A[31-4O模型組、2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein治療組。對(duì)照組,DMSO組側(cè)腦室注射0.9%生理鹽水，其余3組側(cè)腦室注射AP
2、1-42制備阿爾茨海默病(AD)癡呆模型大鼠，1周后，不同劑量Genistein治療組分別用2.0mg/kg和20.0mg/kgGenistein灌胃，DMSO組則用0.5%DMSO溶劑灌胃,對(duì)照組與AP1-40組分別用0.5%生理鹽水灌胃，1次/d,連續(xù)四周后,通過Y迷宮試驗(yàn)測(cè)定各組大鼠工作記憶,利用RT-PCR分析大鼠海馬組織中STAT3和Caspase-3mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果單獨(dú)給予Api-40的大鼠在Y迷宮試驗(yàn)中自發(fā)交替反應(yīng)率明顯降低，海馬STAT3的mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低，但Caspase-3mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著上升；低劑量Genistein組逆轉(zhuǎn)
3、Api-40形成的損傷，給予高劑量Genistein(20mg/kg)后,檢測(cè)結(jié)果與A[31-40組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論低劑量Genistein通過上調(diào)STAT3mRNA同時(shí)抑制Caspase-3基因表達(dá)拮抗了Api-40誘導(dǎo)的神經(jīng)毒作用，而高劑量Genistein表現(xiàn)出相反的效應(yīng)與機(jī)制。以上提示，給予低劑量Genistein可能有助于預(yù)防或延緩AD患者認(rèn)知功能的衰退。關(guān)鍵詞染料木黃酮；工作記憶；B淀粉樣蛋白；Y迷宮；實(shí)時(shí)定量PCR［中圖分類號(hào)］R749.161［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A［文章編號(hào)］1674-0742(2014)10(b)?0058-03［基金項(xiàng)目］山西省高等
4、學(xué)校科技硏究開發(fā)項(xiàng)目(20091133X［作者簡介］原麗(1978.3-),女，山西長治人，碩士，助教，硏究方向：神經(jīng)生理學(xué)。［通訊作者］張翠英(1963.6-),女，山西長治人，碩士研究生，教授，硏究方向：神經(jīng)生理。來源于大豆的異黃酮類物質(zhì)染料木黃酮(Genistein)又稱金雀異黃素，其結(jié)構(gòu)特與相對(duì)分子量均與雌二醇(E2)的結(jié)構(gòu)相似，與雌激素受體B具有較高的親和力，被稱為植物雌激素［1］。因而被認(rèn)為低劑量的Genistein可能是雌激素替代治療或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的有效措施。體外研究也發(fā)現(xiàn)，低劑量Genistein可通過激活A(yù)kt誘導(dǎo)Nrf2活性,從而降低淀粉樣肽
5、誘導(dǎo)的神經(jīng)元降解，改善AP1-40所致的癡呆模型大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶的損傷［2］。高劑量的Genistein可以產(chǎn)生神經(jīng)元細(xì)胞毒作用，并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡⑶；但不同濃度Genistein對(duì)癡呆模型大鼠工作記憶的具體影響如何及其可能的機(jī)制還未見報(bào)道。P淀粉樣肽(P-amyloidpeptides,A［3)在腦內(nèi)沉積是阿爾茨海默病(Alzheimer'sdiseasezAD)發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ),最終患者岀現(xiàn)進(jìn)行性的學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能障礙［4］。故該實(shí)驗(yàn)通過側(cè)腦室注射AP1-40制備AD模型大鼠，觀察不同劑量的Genistein對(duì)AD模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶和工作記憶的影響，并探討
6、其可能的機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法1.1動(dòng)物及給藥3月齡的健康雄性SpragueDawley(SD)大鼠(230±30)g50只，由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。Genistein和A^l-40試劑均購于美國Sigma公司產(chǎn)品，A[31-40溶于0.9%的生理鹽水，Genistein溶于0.5%二甲基亞颯(DMSO),SD大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)后，固定暴露顱骨，參照腦立體定位圖譜，側(cè)腦室給藥；Genistein灌胃1次/d,堅(jiān)持4周。1.2實(shí)驗(yàn)分組隨機(jī)將SD大鼠分為5組09%生理鹽水組、0.5%DMSO溶劑組、25nmolA[31-40組
7、、2.0mg/kgGenistein+Api-40組、20mg/kgGenistein+Api-40o1.3Y迷宮測(cè)試Y迷宮由3個(gè)等長互為120。角的臂組成，隨機(jī)定為A、B、C區(qū)。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠放入1個(gè)臂的末端，讓其自由出入3個(gè)臂，記錄持續(xù)8min,并記錄大鼠進(jìn)入各區(qū)的次序和總次數(shù)(N),以連續(xù)進(jìn)入3個(gè)不同的臂為1次正確交替反應(yīng),記錄正確交替反應(yīng)次數(shù)。自發(fā)交替反應(yīng)率(％)二[正確交替反應(yīng)次數(shù)/(N?2)]xl00o1.4實(shí)時(shí)熒光定量PCR行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,5組大鼠斷頭處死、取腦，并分離岀海馬組織進(jìn)行超聲勻漿、提取總RNA、逆轉(zhuǎn)錄為cDNA、然后采用Re
