線粒體和細胞核的制備與觀察.doc

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1、華南師范大學實驗報告學生姓名何茂輝學號20062501302專業(yè)生物科學年級、班級06科三課程名稱細胞生物學實驗實驗項目實驗類型□驗證□設(shè)計□綜合實驗時間09年5月12日實驗指導老師尤蓉、周仁超實驗評分線粒體和細胞核的制備與觀察實驗目的：1.掌握用差速離心法分離動物細胞核及線粒體的技術(shù)。2.掌握細胞核的鑒定以及線粒體活性染色鑒定。實驗原理：1.制備線粒體及細胞核采用組織勻漿在懸浮介質(zhì)中進行差速離心的方法。2.詹納斯綠B是一種活體染料，能對動植物的細胞或組織在活體狀態(tài)下進行無毒害的染色。3.線粒體內(nèi)膜上

2、分布有細胞色素氧化酶,該酶能使脂溶性的詹納斯綠B染料保持在氧化狀態(tài)呈現(xiàn)藍綠色，從而使線粒體顯色，而胞質(zhì)中的染料被還原成無色。4.Gimesa是一種復合染料，即為酸性染料與堿性染料的結(jié)合物。實驗步驟：1.用頸椎脫臼法處死小鼠，置于解剖盤中剪開腹腔，取小白鼠肝剪成小塊放入小燒杯內(nèi)用吸管吸取生理鹽水，反復浸泡沖洗肝臟，洗去血液。2.加預冷的0.25mol/L蔗糖緩沖液勻漿(10ml,分次加)3.雙層尼龍布過濾，濾液(制2張涂片①,1張自然干燥）4.將濾液5mL覆蓋于相同容積的0.25mol/L蔗糖緩沖液上5

3、.700×g離心10min，沉淀（細胞核及碎片,制一張涂片③）,上清液(制2張涂片②)6.上清液11000×g離心10min，上清液(制一張涂片B)7.顯微鏡檢測人口腔粘膜上皮細胞線粒體的超活染色觀察1.用消毒牙簽的鈍端在自己口腔頰粘膜處稍用力刮取口腔上皮細胞，均勻地涂布在載玻片上的染液中，染色5-15min。2.蓋上玻片，四周溢出的染液用吸水紙吸干。3.低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細胞，換高倍鏡或油鏡觀察?？梢姳馄綘钌掀ぜ毎暮酥車|(zhì)中分布著一些被染成藍綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即為線粒體。結(jié)果

4、與分析：1.表1各涂片觀察結(jié)果編號觀察結(jié)果①沒有多余的血細胞，細胞核分布較少且不清晰，含有較多的混雜的細胞質(zhì)碎片②較多雜質(zhì)與線粒體混雜，細胞核含量極少③含有較多的細胞核與少量的雜質(zhì)碎片，細胞核形態(tài)較清晰A視野中的線粒體數(shù)量較多，形態(tài)較清晰，雜質(zhì)較少B線粒體數(shù)目極少，多為雜質(zhì)2.純化后的線粒體裝片即涂片A視野中的線粒體數(shù)量較多，呈藍綠色,小棒狀或啞鈴狀，雜質(zhì)較少，分離的線粒體的純度較高。3.