藥物的體外抗菌試驗.ppt

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1、微生物與藥學(xué)的關(guān)系1.某些微生物可以生產(chǎn)藥物（微生物制藥）2.微生物可能會污染藥品（藥物的微生物檢查）3.某藥物有能抑菌或是殺菌（藥物的抗菌試驗）藥物的體外抗菌試驗藥物的體外抗菌試驗用途：抗菌藥物的篩選、藥物的抗菌譜測定及臨床藥物敏感性試驗等方面。抑菌：即抑制微生物的生長繁殖，但不能殺死微生物，在藥物除去后微生物又能生長；殺菌：即能殺死微生物，當(dāng)藥物除去后，微生物也不能再生長繁殖。兩者并非絕對，只是在一定條件下相對而言。常用的體外抑菌試驗瓊脂擴(kuò)散法濾紙片法挖溝法連續(xù)稀釋法瓊脂擴(kuò)散法原理：藥物可以在瓊脂培

2、養(yǎng)基中自由擴(kuò)散，形成一定濃度的含藥區(qū)域。由于各種微生物對不同藥物或同一藥物不同濃度的敏感性不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距離，根據(jù)其大小，可以了解藥物的抗菌作用大小或是微生物對試驗藥物的敏感性。濾紙片法：制成含菌平板后，將濾紙片蘸取藥液置于平板上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，量取抑菌圈直徑以此判斷試驗藥物抑菌作用的強(qiáng)弱。用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗。挖溝法：1、在瓊脂平板上挖溝，溝兩邊垂直劃線接種各種試驗菌，溝內(nèi)加入藥液。2、培養(yǎng)后，根據(jù)溝兩邊所生長的試驗菌離溝的距離來判斷藥物對試驗菌的抗菌作用強(qiáng)弱。適用于

3、在一個平板上試驗一種藥物對幾種不同試驗菌的抗菌作用。瓊脂擴(kuò)散法具有方法簡便，技術(shù)要求不高，易掌握操作的特點。但精確度不高，一般能用于定性或初步判斷其作用的強(qiáng)弱。液體稀釋法是一種測定藥物的抗菌作用定量方法，較瓊脂擴(kuò)散法精確，因而運用較普遍。連續(xù)稀釋法可用于測定藥物的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）?？梢杂靡后w培養(yǎng)基，也可用固體培養(yǎng)基。凡能抑制試驗菌生長的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）。以培養(yǎng)后無細(xì)菌生長的最高藥物稀釋

4、度為最小殺菌濃度（Minimalbactericidalconcentration，MBC）。液體連續(xù)稀釋法1、在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗藥物作連續(xù)對倍稀釋，使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減。2、再于各管中加入等量的實驗菌，經(jīng)16～24h培養(yǎng)后，與陰性及陽性對照管進(jìn)行對照觀察。3、將未長細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿。如培養(yǎng)后重新長出試驗菌，說明該藥僅有抑菌作用。如無菌生長則可以認(rèn)為該藥物有殺菌作用。聯(lián)合抗菌試驗在藥學(xué)中，常需要檢查兩種抗菌藥物在聯(lián)合應(yīng)用時的相互作用以及抗菌藥物與不同PH值或不

5、同離子溶液的相互影響。加強(qiáng)藥物抗菌作用的為協(xié)同（synergism）；減弱藥物作用的為拮抗（antagonism）；互相無影響的為無關(guān)（indifference）；作用二者之和為累加（addition）。聯(lián)合抗菌試驗的常用方法一、紙條試驗（paperstriptest）即在已接種實驗菌的平板表面垂直放置兩條浸有一種藥液的濾紙條，培養(yǎng)后根據(jù)抑菌區(qū)的加強(qiáng)、減弱或無影響來判斷它們在聯(lián)合應(yīng)用時的效應(yīng)。圖20-2是紙條實驗的示意圖。圖20-2是紙條實驗的示意圖。圖中A列的兩紙條中只有一條含有抗菌藥物，另一條不含抗

6、菌藥物；B列的兩紙條均含有抗菌藥物。二、棋盤格法（checkboardtest）是由于在試驗時,含兩種不同濃度藥物的試管排列呈棋盤狀而得名,用以評價兩種藥物同時用不同濃度進(jìn)行聯(lián)合試驗時的抗菌活性。實驗時排列6排試管，每排6管，共36管使成方塊，A及B藥各以液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，A藥各稀釋度縱行定量加入各管，B藥各稀釋定量按橫排加入，兩藥同時作單獨抗菌實驗對照。然后加入定量菌液，經(jīng)培養(yǎng)后觀察結(jié)果?？咕囼灥挠绊懸蛩?、試驗菌：用專門的供應(yīng)機(jī)構(gòu)提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。試驗菌應(yīng)

7、合理保藏，用前加以純化及生物學(xué)特征鑒定。所用的試驗菌株應(yīng)處于對數(shù)生長期，因此期的微生物對外界因素變化最敏感。試驗結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗菌的接種量成反比關(guān)系，故應(yīng)選用適宜的接種量。抗菌試驗的影響因素2、培養(yǎng)基抗菌試驗的培養(yǎng)基應(yīng)按試驗菌的需求配制，如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基，抗真菌藥物試驗需用沙氏培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的酸堿度、電解質(zhì)、還原性物質(zhì)等均可影響試驗結(jié)果，實驗時應(yīng)盡可能排除各種影響實驗結(jié)果因素的摻入。經(jīng)無菌檢查合格?？咕囼灥挠绊懸蛩?、抗菌藥物藥物的濃度、pH及含有的其他成分均可影響試驗結(jié)果

8、，特別是中草藥制劑往往含有色素、雜質(zhì)和鞣質(zhì)等，這些均可造成錯誤結(jié)果，應(yīng)加注意?？咕囼灥挠绊懸蛩?、對照試驗：為精確判斷實驗結(jié)果，試驗時應(yīng)設(shè)各種對照，包括試驗菌對照、已知藥物對照及溶劑和稀釋液對照等。在實際工作中，往往可見到體外實驗有作用的藥物，進(jìn)入機(jī)體后由于各種原因而失效，有的藥物毒性很大也不能用于臨床。