項目7藥物體外抗菌試驗技術.ppt

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1、7　藥物體外抗菌試驗技術模塊1必備知識——藥物的體外抗菌試驗主要用于篩選抗菌藥物或測定細菌對藥物的敏感性，又稱藥敏試驗。體外抗菌試驗包括抑菌和殺菌兩個方面。（一）體外抑菌試驗體外抑菌試驗是最常用的抗菌試驗，常用的方法主要有瓊脂擴散法和系列稀釋法。１.連續(xù)稀釋法1)液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法2)固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法:平板法、斜面法２.瓊脂擴散法1）濾紙片法2）挖溝法3）管碟法4）打孔法最小抑菌濃度(MIC)：MIC是指該藥物能抑制細菌生長的最低濃度。通常用MIC評價藥物抑菌作用的效力，以μg/ml或U/ml表示。其值越小，說明抑菌作用愈強。(二)

2、體外殺菌試驗用途：評價藥物對微生物的致死活性1．最小殺菌濃度的測定是取MIC終點以上未長菌的各管培養(yǎng)液，分別取出并移種于無菌平板上，培養(yǎng)后凡平板上無菌生長的藥物最低濃度，即為該藥物的MBC。對微生物廣義而言，也可稱之為最小致死濃度(MLC)。某藥物能殺死微生物的最低濃度。2．活菌計數(shù)法在—定濃度的定量藥物內，加入—定量的試驗菌，作用—定時間后取樣稀釋，再取—定量的此稀釋液混入未凝固的瓊脂培養(yǎng)基中，立即傾注成平板，培養(yǎng)后計算菌落數(shù)。由于每個菌落是由—個菌細胞繁殖而來，則菌落數(shù)或菌落形成單位CFU)乘以稀釋倍數(shù)，再除以稀釋液用量，即得該藥物與

3、試驗菌的混合液中每毫升內存活的細菌數(shù)或CFU，從而可算出該藥物對細菌的致死率。3．酚系數(shù)測定是用來測定消毒劑效力的一種指標，是以石炭酸為標準，在相同的實驗條件下，將消毒劑和石炭酸的殺菌力作比較，所得的殺菌效力的比值，石炭酸系數(shù)≥2為合格。（三）聯(lián)合抗菌試驗法同時應用兩種抗菌藥物時，兩種藥物之間既可能產(chǎn)生相互影響，也可能彼此不影響；產(chǎn)生影響時，既可能是相互加強(協(xié)同作用)，或兩藥作用出現(xiàn)累加現(xiàn)象(即兩藥作用之和)也可能是相互減弱(拮抗作用)，要確定兩種藥物之間的作用關系時，通常需用聯(lián)合抗菌試驗法。最簡便、最常用的方法：紙條或紙片試驗法。二、

4、藥物的體內抗菌試驗體外抗菌試驗有效的藥物，還需要經(jīng)過體內抗菌試驗證明有效后，才能推薦應用于臨床。體內抗菌試驗即動物的實驗治療或保護力試驗。動物實驗治療的方法，大致是先用致病菌使動物體表或體內感染，造成感染動物模型，然后按不同劑量、不同給藥方法(如腹腔注射、皮下注射、肌肉注射或口服等)以及間隔不同時間進行實驗治療。實驗時還要設立一組動物用生理鹽水代替藥物進行對照治療。然后根據(jù)實驗組與對照組的動物死亡數(shù)或內臟的含菌數(shù)，評價藥物的作用和效力。三、抗菌試驗的影響因素在抗菌試驗中應有效控制其影響因素，才能確保試驗的科學性和準確性，主要的影響因素有：

5、①試驗菌②培養(yǎng)基③供試藥物④對照試驗第二節(jié)　滅菌制劑的無菌檢查無菌檢查的基本原則嚴格進行無菌操作正確進行樣品采集無菌檢查用培養(yǎng)基需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基陰性對照及陽性對照陰性對照陽性對照抑菌試驗無菌檢查法無菌檢驗結果判斷陰性對照應不長細菌，說明培養(yǎng)基本身是無菌可靠的；陽性對照試驗必須長菌，說明應用的細菌是可以在該試驗條件下正常生長的。需氧菌陽性對照菌：金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003或藤黃八疊球菌CMCC(B)28001厭氧菌陽性對照菌：生孢梭狀芽胞桿菌CMCC(B)64941真菌陽性對照菌：白色

6、念珠菌CMCC(F)98001或曲霉菌ATCC16404需要進行無菌檢查的藥品、敷料、滅菌器具的范圍：(藥品、敷料按《中國藥典》收載的無菌檢查法的規(guī)定進行，生物制品應按照《生物制品制造及檢定規(guī)程》中有關規(guī)定進行)各種注射劑：用于肌肉、皮下和靜脈的各種針劑，包括注射用的無菌水、輸液、注射劑原液等。眼用及外傷用制劑：用于眼科手術、角膜創(chuàng)傷及一般創(chuàng)傷、潰瘍和燒傷等外科用藥制劑。外科用的敷料、器材：如外科手術用的脫脂棉、紗布、縫合線及一次性注射器與一次性無菌手術刀片、輸血袋等。植入劑：用于包埋于人體內的藥物制劑，如不溶于水的激素、免疫藥物及抗腫瘤

7、藥物等無菌的制劑?？晌盏闹寡獎喝缒傅扔糜谥寡⒖杀唤M織吸收的各種藥物制劑。無菌檢查法（一）非抗菌劑、無防腐劑、及非油劑藥物的無菌檢驗一般藥品的無菌檢驗，通常應用直接接種法。若被檢品是液體，可直接接種于培養(yǎng)基內。若被檢品是固體粉末或凍干制劑，則需用無菌生理鹽水溶解，或制成均勻懸液再作檢驗。若被檢品是無菌敷料，則以無菌操作打開包裝，于各部位剪取1cmX3cm大小的樣品，再接種到培養(yǎng)基中。（二）油劑的無菌檢驗油劑藥物與液體培養(yǎng)基不能混溶，故常漂浮于液體培養(yǎng)基表面而影響試驗結果。因此，此類藥物做無菌檢驗時，應在培養(yǎng)基內加入表面活性劑(吐溫

8、—80)，使藥物均勻分布于培養(yǎng)基中，以利于細菌的生長和檢出。有的藥物如青霉素油劑等，由于粘稠度過大，可先用滅菌植物油或滅菌液體石蠟進行一定倍數(shù)的稀釋，然后取樣接種到含吐溫—80的培養(yǎng)基中，充分