霍亂弧菌檢測(cè).ppt

《霍亂弧菌檢測(cè).ppt》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、霍亂弧菌的采樣與檢測(cè)寧波市疾控中心微生物檢驗(yàn)科楊元斌概況霍亂弧菌（V.cholera）是人類(lèi)霍亂的病原體，霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次（7次）大流行。主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐、腹瀉、失水，死亡率甚高。屬于國(guó)際檢疫的烈性傳染病。病原學(xué)霍亂弧菌屬于弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性菌體短小，稍彎曲，兩端鈍圓，長(zhǎng)1.5～2.0μm,寬0.3～0.4μm。菌體尾端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑，在暗視野顯微鏡下呈流星樣運(yùn)動(dòng)，培養(yǎng)溫度以37℃為最適宜，在堿性（PH8.8～9.0）肉湯或蛋白胨培養(yǎng)基上易于生長(zhǎng)。霍亂弧菌染色圖片革蘭染色鞭毛染色分群和分型：根據(jù)O抗原的特異

2、性，可將霍亂弧菌分成139個(gè)血清群。根據(jù)是否與O1抗血清凝集分兩大群，O1群霍亂弧菌：凡能與O1群抗血清發(fā)生凝集非O1群霍亂弧菌：凡不被O1群抗血清凝集的。O1群霍亂弧菌的生物型1、古典生物型（前六次大流行）2、E1Tor生物型（第7次1961年來(lái)）。兩個(gè)生物型具有相同的血清型。我國(guó)流行以ElTor霍亂弧菌為主。O1群霍亂弧菌的血清分型型別別名O抗原成份原型稻葉型（Inaba）A、C異型小川型（Ogawa）A、B中間型彥島型（Hikojima）A、B、C非O1群霍亂弧菌O139群霍亂弧菌1992年，在印度印度馬德拉斯、泰米爾納德發(fā)生的霍亂疫情，分離到的菌株不與O1群霍

3、亂血清凝集，但是引起O1群霍亂的典型癥狀。引起WHO重視，定為O139群霍亂弧菌，被認(rèn)為下一次霍亂大流行主角。O139的生物學(xué)特征：生化特征與O1菌基本相同。含有與O1群霍亂弧菌相同毒力基因除O抗原不同外，其它性狀均與EL-Tor生物型相似。毒力蛋白及其調(diào)控因子與El-Tor霍亂具有高度同源的編碼。O139菌可以產(chǎn)生莢膜與O1群霍亂無(wú)交叉免疫力環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)耐藥性強(qiáng)標(biāo)本采集和送檢1、糞便采集（1）采樣應(yīng)在發(fā)病早期，服用抗菌藥物之前完成，并盡快送到檢驗(yàn)室。糞便標(biāo)本采集方法如下：用棉拭子采取自然排出的新鮮大便，也可用直腸棉拭或采便管由肛門(mén)插入直腸內(nèi)3cm-5cm處采取，水

4、樣便采取1ml-3ml，成型便采取指甲大小的糞便量。病人的嘔吐物，沾染糞便的衣服和用具，也可作為檢材。（2）送檢劇烈腹瀉病人的水樣便含有大量病菌，直接分離培養(yǎng)不難檢出陽(yáng)性。不能立即檢查的，要接種于培養(yǎng)基內(nèi)，盡快送往檢驗(yàn)室。送檢標(biāo)本可放入（PH8.6-9.0）堿性蛋白胨水，也可放入文—臘二氏保存液或插入Cary-Blair二氏半固體保存培養(yǎng)基中。2、環(huán)境水體：水體的采樣一般要求用滅菌的500ml水樣瓶采集相對(duì)靜止的30cm以?xún)?nèi)）500ml，加蓋密封后在室溫表層水。取水點(diǎn)的選擇應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查等資料確定，同時(shí)，采樣時(shí)應(yīng)選擇在水流平穩(wěn)或靜止處吸取。非疫情狀態(tài)下的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)

5、間一般在清晨時(shí)，此時(shí)水體未受人群活動(dòng)等因素影響。每個(gè)采樣點(diǎn)中采樣位置應(yīng)相距數(shù)米、采集不少于2瓶做為平行檢測(cè)。（20-25℃）下送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。3、水產(chǎn)品水生動(dòng)物的采樣通常選取活的或新鮮的水生動(dòng)物為采集對(duì)象，有時(shí)也應(yīng)考慮冰凍的水生動(dòng)物，以無(wú)菌操作采集合適的部位，如鰓部和/或腸內(nèi)容物等，置采樣瓶（管）或食品采樣袋密封，在常溫下送檢。有條件的采樣點(diǎn)可將水生動(dòng)物整體采回實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行相關(guān)處置。同時(shí)，要求以無(wú)菌棉簽涂抹五只（條）以上的某類(lèi)水生動(dòng)物體表、鰓及/或肛門(mén)，置堿性蛋白胨水送檢，每管堿性蛋白胨水作一份樣品看待。培養(yǎng)1先以堿性蛋白胨水（pH8.6）作為增菌液；再用強(qiáng)選擇性分離培

6、養(yǎng)基使用慶大霉素培養(yǎng)基或TCBS培養(yǎng)基或4號(hào)培養(yǎng)基；弱選擇性培養(yǎng)基使用堿性瓊脂或堿性膽鹽。應(yīng)注意不同廠商以及不同批號(hào)培養(yǎng)基的質(zhì)量，每批培養(yǎng)基在使用前必須進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。培養(yǎng)2檢樣經(jīng)堿性胨水37℃，8-12h增菌后，每份樣品分別接種一個(gè)9cm直徑的慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂平板和一個(gè)堿性瓊脂平板進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。同時(shí)，以無(wú)菌吸管吸取0.2-0.5ml增菌液接種到新的堿性蛋白胨水中，進(jìn)行二次增菌培養(yǎng)后，再如上述步驟進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。特別強(qiáng)調(diào)所有環(huán)境樣品的增菌分離培養(yǎng)步驟必須包括上述二次增菌和強(qiáng)、弱雙平板分離。鑒定TCBS上出現(xiàn)黃色菌落，4號(hào)瓊脂或慶大霉素平板上出現(xiàn)灰褐色中心

7、的菌落，均為可疑菌落，應(yīng)使用O1群和O139群霍亂弧菌的多價(jià)和單價(jià)抗血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報(bào)告。疑似菌落鑒定基本要求：分別從慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂、堿性瓊脂平板上各挑取5個(gè)以上的（少于5個(gè)的全部挑?。┮伤凭浣臃N于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面置37℃18-24h純培養(yǎng)（即每份樣品至少?gòu)?個(gè)分離平板上獲得約20株可疑菌落菌株），取斜面純培養(yǎng)物進(jìn)行O1群及O139群霍亂診斷血清玻片凝集試驗(yàn)，血清凝集陽(yáng)性的菌株繼續(xù)相關(guān)的系統(tǒng)鑒定并報(bào)告結(jié)果。必須注意同一樣品中O1、O139群霍亂弧菌可能同時(shí)存在，有必要對(duì)所有選出的菌株都進(jìn)行凝集試驗(yàn)，以免