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1、第19卷第7期牡丹江大學(xué)學(xué)報(bào)Vol.19No.72010年7月JournalofMudanjiangUniversityJul.2010文章編號(hào)：1008-8717（2010）07-0092-03黑曲霉生產(chǎn)糖化酶及酶活測(cè)定單海艷（牡丹江大學(xué)，黑龍江牡丹江157000）摘要：本文對(duì)黑曲霉突變株Uv11－48生產(chǎn)糖化酶液體深層發(fā)酵進(jìn)行了全程生產(chǎn)工藝的研究，證實(shí)了黑曲霉突變株是一種產(chǎn)孢力強(qiáng)、抗污染能力強(qiáng)、易培養(yǎng)的糖化酶生產(chǎn)菌，經(jīng)液體深層通風(fēng)發(fā)酵可得出：只要充分利用突變株的有利條件，掌握好菌種特性，合理配制營(yíng)養(yǎng)，控制好發(fā)酵條件，便可獲得高酶活力的高產(chǎn)糖化酶。本
2、實(shí)驗(yàn)還運(yùn)用了幾種酶活力測(cè)定方法，以資進(jìn)行優(yōu)劣探討。關(guān)鍵詞：黑曲霉；液體通風(fēng)發(fā)酵；糖化酶；酶活力中圖分類號(hào)：Q-331文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B一、前言鍵。一般淀粉水解程度達(dá)80％。（一）黑曲霉菌種特性（1）糖化酶中糖和蛋白組成1．黑曲霉的分類地位糖化酶是一種糖蛋白，通常碳水化合物占4%-18％，黑曲霉在分類學(xué)上處于：真菌門、半知菌亞門、絲這些碳水化合物主要是半乳糖、葡萄糖、葡萄糖胺和甘孢綱、絲孢目、叢梗孢科、曲霉屬、黑曲霉群，拉丁學(xué)露糖，糖化酶殘基的排列在其熱和酸堿穩(wěn)定性上有特殊名：Aspergillusniger。意義。2．黑曲霉形態(tài)、生理、生態(tài)特性（2）糖化酶
3、組分多型性孢子頭呈暗黑色，菌絲體由具橫隔的分枝菌絲構(gòu)成，真菌產(chǎn)生的糖化酶組分多型性是常見的，市售的糖菌絲黑褐色，頂囊球形，小梗雙層，分生孢子球形，平化酶中可分離出葡萄糖酶?和葡萄糖酶И兩種組分。而滑或粗糙。一般進(jìn)行無性生殖，其可育細(xì)胞稱足細(xì)胞。市售黑曲霉生產(chǎn)的糖化酶曾分離出六種活性組分，每種3．黑曲霉突變株的形態(tài)、生理、生態(tài)、特征均可從可溶性淀粉中釋放出單一的β-D-葡萄糖。這六種在查氏培養(yǎng)基上菌落曲型為炭黑色，有輻射溝紋，組分的分子量，沉淀系數(shù)，化學(xué)組分，等電點(diǎn)，酶的動(dòng)從菌落邊緣向中心，分化為伸長(zhǎng)部位，活性部位，成熟力學(xué)及其它性質(zhì)各異。培養(yǎng)基成分和的
4、生產(chǎn)條件對(duì)糖化部位，老化部位幾個(gè)區(qū)域即孢子萌發(fā)最早出現(xiàn)于中心部酶組分多型性也有影響，天然糖化酶在微生物培養(yǎng)或酶位是伸展部位，并逐漸形成密生部位，分生孢子部位，的制備過程中可能受葡萄糖苷酶和蛋白酶的作用而成多最后在中心出現(xiàn)的是成熟部位，菌落背面無色或稍黃。型性的酶類。（二）糖化酶的分類、地位、性質(zhì)及用途（3）糖化酶的熱穩(wěn)性1．糖化酶在國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)，在系統(tǒng)命名法中的地工業(yè)用的糖化酶都是利用它的熱穩(wěn)性，α-環(huán)狀糊精位可提高糖化酶的熱穩(wěn)性，最適溫度范圍一般為50℃～糖化酶是淀粉酶，在系統(tǒng)命名法中屬水解酶類。60℃。2．糖化酶的性質(zhì)（4）從酶PH穩(wěn)定性上看：糖
5、化酶具較寬的PH糖化酶（glucamylase）又名糖化型淀粉酶值適應(yīng)范圍，但最適PH為4-5。（glueoamylase）或淀粉葡萄糖苷酶。其系統(tǒng)名稱為淀粉（5）Ca離子與酶結(jié)合后可使結(jié)構(gòu)變得松散些，更α1.4-葡萄聚糖水解酶。糖化酶是一種胞外外切酶，但其有利于催化反應(yīng)。專一性低，主要是從淀粉鏈的非還原性末端切開α-1.4-（6）糖化酶與底物親和性收稿日期：2009-11-26作者簡(jiǎn)介：?jiǎn)魏ＦG（1977—），女，牡丹江大學(xué)化工系講師，研究方向：生物教學(xué)。92糖化酶是將麥芽糖糊精轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖，底物水解配方：斜面種子培養(yǎng)基：蔗糖30g硫酸銨3g磷酸速
6、度主要受底物分子的大小及結(jié)構(gòu)影響。同時(shí)也受水解氫鉀1g硫酸鎂0.5g硫酸鐵0.01g水1000ml瓊脂2%碳鏈序列中F一個(gè)鍵的影響，碳鏈越來越大。其最大反液體搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基：玉米面4％，豆餅粉3％應(yīng)速度隨底物碳鏈的增長(zhǎng)而增加，呈線性變化。麥麩1%Kcl0.5g水1000ml自然PH通風(fēng)3．糖化酶的用途恒溫液體深層通風(fēng)發(fā)酵培養(yǎng)基：玉米粉10%豆餅主要用途是作淀粉糖化劑。在食品工業(yè)制造葡萄糖、粉4%麥麩1%水1000mlPH4.5麥芽糖、糊精糖漿和直鏈淀粉薄膜，改善面色質(zhì)地，加1．粗酶提取工蔬菜、制造菜汁、菜泥。在發(fā)酵工業(yè)方面與α-淀粉一發(fā)酵液→過濾→鹽析
7、→固形物→烘干→加入淀粉添起還廣泛用在谷氨酸、檸檬酸發(fā)酵生產(chǎn)中，作為淀粉原充劑→磨粉→粗酶制劑。料，代替了麥芽和液體，提高了淀粉利用率。在我國(guó)，2．酶活力測(cè)定糖化酶還用于處理原理，水解棉中的低聚糖，減少棉纖酶活力測(cè)定方法維的粘纏以利于紡紗。（一）鋼圈法：5ml3%瓊脂倒皿→再加5ml二、材料與方法可溶性淀粉與3%瓊脂→放入三個(gè)滅過菌的鋼圈分（一）材料：菌種：黑曲霉別滴入不同濃度的酶液→定期測(cè)定透明圈直徑。儀器：恒溫培養(yǎng)箱離心機(jī)水浴鍋恒溫液體振蕩（二）比色法：10ml20%可溶性淀粉5ml檸培養(yǎng)器小型液體發(fā)酵罐分光光度計(jì)等檬酸PH4.8（對(duì)照不加酶液，處
8、理加1ml）加1ml試劑：鏈霉素0.1%苯甲酸鈉乳酸氫氧化鈉硫酸10%NaOH終止反應(yīng)，對(duì)照補(bǔ)
