麩曲糖化酶活力測定方法探討-論文.pdf

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1、第27卷第3期四川理工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)VoL27NO．32014年6月JournalofSichuanUniversityofScience＆Engineering(NaturalScienceEdition)Jun．2014文章編號：1673—1549(2014)03-0006-04DOI：10．11863／j．suse．2014．03．02麩曲糖化酶活力測定方法探討羅惠波，王毅，邊名鴻，楊曉東，楊建勤(1．四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院，四川自貢643000；2．釀酒生物技術(shù)及應(yīng)用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川自貢643000；3．江安縣工業(yè)園區(qū)管理委員會(huì)，四川江

2、安644200；4．成都新憶坊商貿(mào)有限公司，成都610036)摘要：糖化酶活力是制曲過程中的一個(gè)重要指標(biāo)。建立了3，5一二硝基水楊酸(DNS)結(jié)合連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀(API)檢測麩曲糖化酶活力的方法。結(jié)果表明：通過t檢驗(yàn)，次碘酸鹽法、DNS法和DNS優(yōu)化法測定糖化酶活力均無顯著性系統(tǒng)誤差，DNS優(yōu)化法的誤差值最低為13．1U／g，RSD值為1．97％。通過F一檢驗(yàn)雙樣本方差分析，DNS優(yōu)化法較快速滴定法、DNS法測定麩曲糖化酶活力的精密度均有顯著性提高，且具有簡便、快捷的特點(diǎn)。關(guān)鍵詞：麩曲；連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀(API)；3，5一二硝基水楊酸(DNS)；糖化酶中

3、圖分類號：TQ925文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A糖化酶(Glucoamylase，EC3．2．1．3．)是一種外切型試劑：MgSO、KH2PO4、NaNO、醋酸、醋酸鈉、葡萄糖苷酶，作為白酒微生物代謝過程主要代謝產(chǎn)物之一，糖、3，5一二硝基水楊酸(DNS)等均為分析純，購于成都其活力大小是衡量麩曲質(zhì)量的重要指標(biāo)¨引。糖化酶能科龍化工試劑廠。按順序水解淀粉或淀粉類似物非還原端的多種糖苷鍵儀器與設(shè)備：uV一2000紫外可見分光光度計(jì)(上海而生成葡萄糖，因此被廣泛運(yùn)用于食品工業(yè)中。常規(guī)尤尼柯有限公司)；連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀(Micro—CFA)測定糖化酶活力方法有次碘酸鹽法、Sch

4、oorl法(DU(美國AstoriaPacificInternationa1)；恒溫水浴鍋(北京中法)、快速滴定法和3，5一二硝基水楊酸(DNS)法等，但興偉業(yè)儀器有限公司)；pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限各個(gè)測定方法均有一定的缺陷。公司)。本文采用微量連續(xù)流動(dòng)分析儀對DNS法進(jìn)行改進(jìn)，1．2固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)利用導(dǎo)管取樣，運(yùn)用分光光度計(jì)的原理，通過電腦軟件稱取10g的麩皮，加水8％(v／m)，KH：PO0．02g，自動(dòng)檢測樣品含量，并與次碘酸鹽法、快速滴定法進(jìn)MgSO40．02g，NNO0．3g，在250mL三角瓶中潤料2h行比較，以期建立檢測麩曲糖化酶活力準(zhǔn)確、實(shí)

5、用、快后，121cI=滅菌30min，趁熱搖散，冷卻至40℃左右，接速、簡便的新方法，并為麩曲生產(chǎn)的規(guī)范化提供數(shù)據(jù)與入0．3％(m／m)麩曲，混合均勻，于溫度30℃、濕度理論支持，更好的指導(dǎo)麩曲生產(chǎn)。95％，培養(yǎng)48h?(22h時(shí)進(jìn)行扣瓶)。1．3粗酶液的制備l材料和方法發(fā)酵結(jié)束后，加入4o℃水170mL。然后加入20mL1．1材料與儀器pH4．6的醋酸一醋酸鈉緩沖溶液，攪勻，40℃保溫浸泡材料：麩曲，由釀酒生物技術(shù)及應(yīng)用四川省重點(diǎn)實(shí)1h，保溫時(shí)每隔10min攪拌1次。用脫脂棉過濾，棄去驗(yàn)室提供；糖化酶(酶活力100000U／g)，上海藍(lán)季科技初濾液，得澄清濾

6、液待用(濾液應(yīng)盡快分析，若30rain發(fā)展有限公司。內(nèi)不能使用，應(yīng)將濾液暫置冰箱中冷藏，分析時(shí)升溫至收稿日期：2014-01-03基金項(xiàng)目：釀酒生物技術(shù)及應(yīng)用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(NJ2010-05；NJ2011-05；NJ2013-03)作者簡介：羅惠波(1969一)，男，四川自貢人，教授，主要從事酒類發(fā)酵方面的研究，(E-mail)1036884458@qq．corn笙查蘭塑羅惠波等：麩曲糖化酶活力測定方法探討740℃后使用)。驗(yàn)分析結(jié)果見表2。1．4檢測方法表2不同方法測定糖化酶活力分析1．4．1酶活力測定方法次碘酸鹽測定糖化酶活力J?？焖俚味ǚ?/p>

7、測定糖化酶活力。3，5一二硝基水楊酸法測定糖化酶活力J。1．4．2連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀檢測在傳統(tǒng)3，5一二硝基水楊酸(DNS)法的基礎(chǔ)上，結(jié)合美國(API)連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀，對麩曲糖化酶和標(biāo)準(zhǔn)糖化酶活力進(jìn)行測定(圖1)。由表2可知，采用不同方法測定糖化酶活力其準(zhǔn)確度有較大的差異。通過誤差和均值分析可知，次碘酸鹽的差值最小，說明次碘酸鹽有較高的準(zhǔn)確度；而DNS法的差值最大，準(zhǔn)確度最低。從RSD值也可以看出，次碘酸鹽法的圖1糖化酶活力測定連接示意圖RSD值為3．6％，較快速滴定法和DNS法準(zhǔn)確度高。1．4．3葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線測定通過t檢驗(yàn)，采用次碘酸鹽法和DNS法測

8、定糖化酶濃縮標(biāo)準(zhǔn)液(10L)：稱取1g