固體曲糖化酶活力的測(cè)定

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1、固體曲糖化酶活力的測(cè)定l實(shí)驗(yàn)原理：1.固體曲在釀造過(guò)程中將原料淀粉轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵糖類的重要酶源。其中其主要作用的是糖化酶，它可將淀粉水解為葡萄糖供微生物發(fā)酵，生成酒精及其它各種相應(yīng)的白酒成分。固體曲質(zhì)量好，糖化活力高，原料淀粉利用率高，出酒率也高。故糖化酶活力的高低是衡量固體曲質(zhì)量的重要指標(biāo)。2.固體曲糖化酶活力定義為：1g絕干固體曲，在30℃、PH=4.6條件下，1h內(nèi)水解可溶性淀粉為葡萄糖的毫克數(shù)。其測(cè)定的方法可用修正的藍(lán)-艾農(nóng)法.l實(shí)驗(yàn)試劑：1.斐林試劑2.0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（準(zhǔn)確稱取1g無(wú)水葡萄糖(預(yù)先烘干)，用水溶解，加5ml濃鹽酸

2、，用水稀釋至1000ml3.乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（PH=4.6）4.0.01mol/LNaOH溶液稱取4gNaOH,用水溶解并稀釋至1000ml5.2%可溶性淀粉溶液準(zhǔn)確稱取2g可溶性淀粉（預(yù)先于100～105℃烘干），加少量水調(diào)勻，傾入80ml沸水中，繼續(xù)煮沸至透明，冷卻后用水稀釋至100ml.l實(shí)驗(yàn)步驟：1.5%固體曲沁出液的提取稱取5.6702g固體曲（以絕干曲計(jì)），置于250ml燒杯中，加入90ml水和10ml,PH=4.6的緩沖溶液，搖勻，于30℃水浴中保溫沁取1h，每隔15min攪拌一次，有脫脂棉過(guò)濾，濾液為5%固體曲沁出液。2.固

3、體曲糖化液的制備吸取25ml2%可溶性淀粉溶液，置于50ml容量瓶中，于30℃水浴中預(yù)熱10min.準(zhǔn)確加入5ml5%固體曲沁出液，搖勻，立即計(jì)時(shí)。于30℃水浴中準(zhǔn)確保溫1h。迅速加入15ml0.1mol/LNaOH溶液，終止酶解反應(yīng)。冷卻至室溫，用水定容至刻度。同時(shí)制作一空白液：準(zhǔn)確吸取25ml2%可溶性淀粉溶液，置于50ml容量瓶中，先加入15ml0.1mol/LNaOH溶液，然后準(zhǔn)確加入5ml空白液，用水定容至刻度。3.測(cè)定吸取斐林甲液、乙液各5ml，置于錐形瓶中，準(zhǔn)確加入5ml空白液，并用滴定管預(yù)先加入適量的0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（使后

4、滴定時(shí)消耗0.1%葡萄糖標(biāo)液在1ml以內(nèi)，且在1min時(shí)間以內(nèi)），搖勻，于電爐上加熱至沸騰，立即用0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至藍(lán)色消失，此次滴定操作需在1min內(nèi)完成。記錄所消耗0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。準(zhǔn)確吸取5ml糖化液代替5ml空白液，其余操作同上。l計(jì)算公式：糖化酶活力=c(V0-V)×式中V0---5ml空白液消耗0.1%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的體積，mlV---5ml糖化液消耗0.1%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的體積，ml---5ml糖化液換算成50ml糖化液中的糖量，g---5ml沁出液換算成100ml沁出液的糖量，gm---絕干固體曲樣品質(zhì)量，

5、50gl實(shí)驗(yàn)記錄：糖化酶活力的測(cè)定空白1空白2空白3試樣1試樣2試樣3絕干固體曲質(zhì)量（g）5葡萄糖濃度(mol/L)0.05555預(yù)加葡萄糖體積(ml)7.008.009.007.008.009.00消耗葡萄糖標(biāo)樣的體積(ml)0.870.610.580.680.590.47l結(jié)果計(jì)算：糖化酶活力1=0.005555×（7.87-7.68）×10糖化酶活力2=0.005555×（8.61-8.59）××糖化酶活力3==0.005555×（9.58-9.47）×10×l結(jié)果討論:在此次實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行初檢時(shí)，可能滴定的誤差較大，導(dǎo)致在復(fù)檢時(shí)有相對(duì)的誤

6、差。