資源描述：
《大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表達-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物技術通報·研究報告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2o12年第9期大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表達田智蕊韓紅武志海李東哲楊美英(吉林農業(yè)大學，長春130118)摘要：以鹽誘導后的大豆根為材料，提取總RNA，RT—PCR得到GmOLPa目的片段。對其蛋白序列分析表明，該蛋白屬于GH64．TLP—SF同源超家族中的PR一5蛋白，第25—244位氨基酸是其保守結構域，與番茄中的PR．5親緣關系最為接近。構建GmOLPa基因ORF的原核表達載體pET一28一GP，并對其在大腸桿菌BL21中的表達條件進行優(yōu)化。SDS—PAGE證實重組質粒能夠在大腸桿菌BL21中表達
2、，目的蛋白分子量約為30kD，最佳誘導時間為4h，最佳IPTG誘導濃度為1．0mmol／L。關鍵詞：PR一5蛋白GmOLPa蛋白基因克隆蛋白序列分析原核表達ProteinSequenceAnalysisandProkaryoticExpressionofGmOLPaGenefromSoybeanTianZhiruiHanHongWuZhihaiLiDongzheYangMeiying(JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118)Abstract：InordertoidentifythefunctionofGmOLPagenefromsoyb
3、ean，totalRNAwasextractedfromtherootofsoybeaninducedbysaltstressandGmOLPagenefragmentwasobtainedbyRT—PCR．GmOLPaproteinsequencewasanalyzedandtheresultsshowedthatGmOLPaproteinbelongedtoPR一5ofGH64一TLP—SFhomologoussuperfamilyandwasthemostcloselygeneticrelationshipwiththePR-5fromtomato．The25—244amino
4、acidsintheGmOLPaproteinsequenceweretheconservativedomain．ProkaryoticexpressionvectorpET-28-GPofGmOLPagenewasconstructedandexpressiveconditionsofpET一28一GPinE．coltBL21wereoptimized．SDS—PAGEwasassayedandshowedthatrecombinantplasmidcouldbeinductedandexpressedinEcolt．Thetargetproteinmolecularweightw
5、asapproximately30kD，theoptimalinductiontimeof4handtheoptimalIPTGinductionconcentrationof1．0mmol／L．Keywords：PR一5proteinGmOLPaproteinGenecloningProteinsequenceanalysisProkaryotieexpression病程相關蛋白(pathogenesis．relatedprotein，PRP／的生理生化功能。大量研究表明，PR．5蛋白不僅能PRs)是指由寄主植物編碼，在病理或病理相關的誘導真菌類的細胞程序性死亡(PCD)L5，保護
6、植環(huán)境下誘導產生的一類蛋白質¨JoPRs最早由Van物免受病害的侵染，還能通過誘導植物細胞的PCD，Loon和VanKammen于1970年在煙草花葉病毒增強植株整體對凍害的抵抗j。冬黑麥葉片的質外(TMV)誘發(fā)產生過敏性壞死反應的煙草葉片中檢測體內分泌的PR．5蛋白在低溫誘導下，與抗凍蛋白有到。之后，病程相關蛋白的研究報道日漸增多。已著同樣的抗凍功效?。目前，已經從大麥、玉米、發(fā)現(xiàn)的病程相關蛋白被歸類為17個家族J。番茄¨。。和小麥?等植物中發(fā)現(xiàn)了PR．5蛋白。PR．5蛋白是PRs蛋白家族中的一類，也被稱為GmOLPa蛋白是大豆在鹽誘導下所產生的一類類甜蛋白(thaumatin．1
7、ikeprotein，TLP)L4J~PR一5蛋蛋白，稱為大豆類滲透蛋白，屬于大豆PR一5家族。白包含了具有多種抗逆功能的滲調蛋白(osmotin)前人研究表明，該蛋白具有抗鹽功能，為更好的在和類滲調蛋白(OLP)，可能使它在植物中具有不同蛋白水平上研究GmOLPa的功能。本試驗從鹽處理收稿日期：2012—02—29基金項目：國家自然科學基金項目(31171478)，吉林省自然科學基金項目(20101573)作者簡介：田智蕊，女，碩士研究生，研究方向：植物
