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《人血白蛋白的原核表達(dá)及應(yīng)用-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物技術(shù)通報·研究報告·BIoTECHNoLoGYBULLETIN2013年第11期人血白蛋白的原核表達(dá)及應(yīng)用李向茸。馮若飛謝晶瑩田偉楊妍梅。王丹馬忠仁(1．西北民族大學(xué)生物工程與技術(shù)國家民委重點實驗室，蘭州730030；2．甘肅省動物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，蘭州7300303．西北民族大學(xué)生命科學(xué)與T程學(xué)院，蘭州730030)摘要：旨在構(gòu)建人血白蛋白(HSA)基因的原核表達(dá)載體pGEX一4T一1rHSA，誘導(dǎo)表達(dá)后純化重組HSA蛋白，制備多克隆抗體并對其進(jìn)行鑒定。根據(jù)GenBank發(fā)表的HSA(NM一000477．5)的核苷酸序列設(shè)計合成1對特異性引物，以人胚肺二
2、倍體細(xì)胞的總RNA為模板，利用RT．PCR擴增HSA基因，將其克隆至pGEX．4T一1載體，構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX．4T．1．rHSA，經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)變性、復(fù)性、親和層析純化后作為免疫原制備多克隆抗體，應(yīng)用間接ELISA和Western—blot方法對所得抗體進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，重組蛋白主要以包涵體的形式存在，分子質(zhì)量為92kD；重組蛋白具有良好的反應(yīng)原性和免疫原性；應(yīng)用其制備的抗血清效價達(dá)到1：10000；純化的多克隆抗體與血源人血清白蛋白和重組人血白蛋白均能產(chǎn)生特異性結(jié)合，具
3、有良好的生物學(xué)活性。關(guān)鍵詞：人血清白蛋白原核表達(dá)包涵體多克隆抗體ProkaryoticExpressionandApplicationofRecombinantHumanSerumAlbuminLiXiangrong'FengRuofei’XieJingying3TianWei。YangYanmeiWangDanMaZhongren(1．TheKeyBio-engineeringandTechnologylaboratoryofNationalityCommission，NorthwestUniversityforNationalities，Lanzhou7303
4、0；2．GansuEngineeringResearchCenterforAnimalCell，Lanzhou730030；3．LifeScienceandEngineeringCollegeofNorthwestUniversityforNationalities，Lanzhou730030)Abstract：ThisstudywasaimedtoexpressandpurifytheproteinofpGEX·-4T-1-rHSAinprokaryocytesandprepareanti·-HSApolyclonalantibody．TheHSAgenewas
5、amplifiedfromhumanembryolungdiploidtotalRNAbyRT—PCR，withprimersbasedonthepublishedHSA(NM_00047．5)sequenceinGenBank．thenitwasclonedintoprokaryoticexpressionvectorpGEX一4T一1toconstructarecombinantexpressionvectorpGEX一4T一1一rHSA．ThepGEX一4T一1一rHSAwastransformedintoEcoliBL21(DE3)．Thepurified
6、expressedproteinwasinjectedintoarabbitandthepolyclonalantibodywasthenprepared，whichwereidentifiedbytheindirectELISAandWestern—blotanalysis．Resultsshowedthattherecombinantproteinmainlyexistsintheinclusionbody，about92kDandithasgoodreactogenicityandimmunogenicity．TheELISAtiteroftheantise
7、rumwasapproximately1：10000．Western—blotanalysisrevealedthatthepurifiedpolyclonalantibodyagainstpGEX一4T一1一rHSAhadaspecificaffinityfornaturalhumanserumalbuminandtheexpressedprotein．KeyWOrds：HumanserumalbuminProkaryoticexpressionInclusionbodyPolyclonalantibody人血清白蛋白(HumanSerumAlbumin，HSA
8、)廣泛應(yīng)用
