資源描述：
《紫杉烷-2α-羥化酶基因的克隆及分析-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第5卷第5期黑龍江科學(xué)Vol_5No．52014年5月HEILONGJIANGSCIENCEmay2014紫杉烷一2~x一羥化酶基因的克隆及分析張悅，劉丹，趙春玲，趙凱(黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱150080)摘要：本試驗成功克隆到了紫杉烷-2ct一羥化酶基因，并將該基因與載體pEASY—T1連接，轉(zhuǎn)化到E．eoliDH5c~中，并對陽性克隆子進行了測序及生物信息學(xué)分析。試驗結(jié)果表明，紫杉烷一20【一羥化酶基因長度為1488bp，與GenBank中收錄的紫杉烷-2oL一羥化酶基因同源性達到99％。本試驗研究為從N．sylviforme內(nèi)生真菌紫杉醇生物合成途徑中克隆關(guān)鍵酶基因
2、提供了借鑒。關(guān)鍵詞：東北紅豆杉；紫杉醇；生物合成；紫杉烷-2c~一羥化酶中圖分類號：Q78文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1674-8646(2014)05-0016-03Analysisandcloningoftaxadiene2~-hydroxylasefromTaxuscuspidataZHANGYue，LIUDan，ZHAOChun—ling，ZHAOKai(CollegeofLifeScience，Heilong]iangUniversity，Harbin150080，China)Abstract：Thestudysuccessfullyclonedthetaxadiene2a
3、—hydroxylasegene．ThegenewasconnectedwithvectorpEASY—T1，transformedintoE．coliDH5c~，thenthepositiveclonesweresequencedandbioinformaticsanalysiswascarriedout．Theresultsshowedthattaxadiene2or—hydroxylasegenelengthis1488bp．a(chǎn)ndthesequencehad99％similaritywithtaxadiene2—hydroxylaseembodiedinGenBank．T
4、hisstudyprovidedareferenceforclonerelatedgenefromMsylviforingtaxolproducingfungi．Keywords：Taxuscuspidata；paclitaxel；biosynthesis；taxadiene2a—hydroxylase紫杉醇(taxo1)是一種具有抗癌活性的三環(huán)二萜類化合生物發(fā)酵法生產(chǎn)紫杉醇基本處于試驗階段，主要限制因素物，最早由Wani等(1971)ElJ發(fā)現(xiàn)。紫杉醇對乳腺癌、卵巢是分離和篩選到的菌株產(chǎn)量太低，難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，因癌和宮頸癌的生長抑制效果十分顯著，對其他癌癥甚此，高產(chǎn)菌株的選
5、育成為當(dāng)前的首要任務(wù)。紫杉醇生物至糖尿病、艾滋病等也具有一定的療效。目前，全球癌合成途徑十分復(fù)雜，目前尚不清楚。但其主要合成分為：萜癥患者增長數(shù)量十分驚人，紫杉醇的需求量不斷提高，單純類前體異戊烯焦磷酸的合成、紫杉醇碳環(huán)骨架巴卡亭Ⅲ的從紅豆杉屬植物中提取和半合成的方法已經(jīng)不能滿足臨床合成和側(cè)鏈的合成’，合成路徑中的催化酶包含幾十種。應(yīng)用，且半合成法也不能擺脫對紅豆杉樹木的依賴，對生態(tài)構(gòu)建高產(chǎn)紫杉醇工程菌株的前提是需要掌握其合成路徑及環(huán)境造成了極大破壞。為了尋找紫杉醇的新藥源，并保護相關(guān)酶基因，將其克隆得到后轉(zhuǎn)入模式生物進行表達，鑒定現(xiàn)有的野生珍奇紅豆杉樹木，科學(xué)家已把目光從紅豆杉
6、樹其是否生產(chǎn)紫杉醇，由此可見內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇生物合成分離提取紫杉醇轉(zhuǎn)向了其他可行途徑。微生物發(fā)酵法是一相關(guān)基因的研究很有發(fā)展前景。目前，有關(guān)紅豆杉屬植物種可以無限生產(chǎn)、大量獲取紫杉醇的方法。但目前利用微細胞培養(yǎng)生物合成紫杉醇途徑的研究取得了突破性的進收稿日期：2014q)4—14基金項目：國家自然科學(xué)基金(31370137、31270130)；教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃(NCET一12--0707)；黑龍江省普通高等學(xué)校新世紀(jì)優(yōu)秀人才培養(yǎng)計劃(1251一NCET-005)；黑龍江省高等學(xué)校農(nóng)業(yè)微生物發(fā)酵技術(shù)科技創(chuàng)新團隊(2012td009)；2013年度黑龍江大學(xué)研究生創(chuàng)新科研
7、項目(YJSCX2013-021HLJU)作者簡介：張悅(1988一)，女，黑龍江齊齊哈爾人，碩士研究生，主要從事微生物遺傳育種方面的科研工作。通訊作者：趙凱(1973一)，男，教授，主要從事微生物遺傳育種方面的科研工作。e-mail：zybin395@126．com。16^y剪鼎'TaXU$chinsns~sagentsVI：Theisolationandstructureoftaxol，anovelantileuke—J衄瑚'T0xu$xmediamicandantitumo
