c57bl／6小鼠cik細胞體外培養(yǎng)及表型分析

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1、128現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志第28卷第6期2013年11月JModLabMed，Vo1．28，No6，Nove．2013C57BL／6小鼠CIK細胞體外培養(yǎng)及表型分析劉秋霞，齊曼，陳玲玲(承德市中心醫(yī)院檢驗科，河北承德067000)摘要：目的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)C57BL／6小鼠細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(CIK)，并研究其表型。方法從脾組織中分離淋巴細胞，經(jīng)過IFN一，CD3單抗，IL-la及IL-2誘導(dǎo)并培養(yǎng)，獲得大量的CIK細胞，F(xiàn)ACS測定CIK表面CD3，CD4，CD8和NK1．1等CD分子表達情況及其百分率。結(jié)果經(jīng)IFN一，CD

2、3單抗，IL-la和IL-2四種細胞因子誘導(dǎo)后，于第4天FACS測定CD3陽性細胞>9O％，CD8陽性細胞>30，NK1．1陽性細胞>15，于細胞因子誘導(dǎo)后第7天收獲CIK細胞后FACS測定CD3陽性細胞>87％，CD8陽性細胞>20和NK1．1陽性細胞>10。結(jié)論CIK細胞培養(yǎng)成功。關(guān)鍵詞：單核細胞；細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(cIK)；表型中圖分類號：R一332文獻標志碼：A文章編號：1671—7414(2013)06—128-03doi：10．3969／J．issn．1671-7414．2013．06．043Prolif

3、eration0fMouseCIKinYitroandPhenotypicAnalysisLIuQiu-xia，QIMan，CHENLing—ling。(Department0fClinicalLaboratory，ChengdeCentralHospital，HebeiChengde067000，China)Abstract：0bjectiveToincubateCIKcellsandtestitsphenotype．MethodsNon-adherentficollseparatedmousespleenmononuc

4、learcellsderivedfromhealthyC57mousewerepreparedandgrowni。nRPMI1640medium．OnethousandIU／mlhumanrecombinantinterferon7wasaddedonday0．After24hoursofincubation，50ng／mlofananti-CD3，100U／mlinter—leukin-l~and300U／mlinterleukin-2wereadded．Cellswereincubatedat37℃inahumidif

5、iedatmosphereof5ml／dlCO2andsub-culturedeverythirddayinfreshcompletemediumwith300U／mlIL-2at3×10cells／m1．CIKcellswereharvestedonday7．ThephenotypeofCIKcellsweretestedbyFlowcytometyusingCD3，CD4。CD8andNK1．1onday0，day4andday7．ResultsTheCIKcellswerephenotypedwithantibodi

6、esagainstCD3，CD8andNK1．1wereconsistentwiththeex—pectedresults．ThepercentageofCD3>90％，CD8>30，NK1．1>10％．ConclusionTheCIKcellswerephenotypedwithantibodiesagainstCD3，CD8andNK1．1wereconsistentwiththeexpectedresults，andpercentageofCD3>90％，CD8>3O，NK1．1>10．Keywords：mononu

7、clearcells；cytokine-inducedkillercells；phenotype細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(Cytokine-induced淋巴細胞，放人含10ml／dl胎牛血清的1640培養(yǎng)killerCIK)是一種用外周血單個核細胞(PBMc)液培養(yǎng)并加入IFN一71000U／ml，CD3單抗50在體外經(jīng)過多種細胞因子培養(yǎng)激活后獲得的非ng／ml，IL—la100U／m1，IL-2300U／ml，于第0MHC限制性的對腫瘤細胞具有高效溶解毒性的天、第4天、第7天FACS測定CD3，CD4，CD8和T細胞。殺

8、瘤譜廣、效率高，主要效應(yīng)細胞為CD3NK1．1，并加入細胞因子IL-2。+CD56+表型T淋巴細胞。小鼠CIK細胞中主1．2．2CIK細胞的表型分析：取流式專用試管3要效應(yīng)細胞為CD3+CD8+表型T淋巴細胞和只，首先往①，②，③試管中依次加入CD3一FITC2CD3+NK1．1+表型T淋巴細胞[1]。