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1、陜西醫(yī)學雜志2013年12月第42卷第12期15'79Survivin表達在胃癌診斷中的作用研究河北冀中能源峰峰集團總醫(yī)院普外一科(邯鄲056200)王彬譚逸然△摘要目的:檢測凋亡抑制基因(Survivin)在胃癌組織中的表達并分析其在胃癌診斷中的意義。方法:采集50例接受手術(shù)的胃癌患者癌變組織及臨近的將抗組織樣本,通過RT—PCR和Westernblot方法檢測SurvivinmRNA和蛋白質(zhì)的表達。使用免疫組織化學方法檢測樣本中Sur—vivn的表達,TUNEL檢測細胞凋亡的狀況。結(jié)果:RT—PCR顯示34(68)例患者的
2、癌變組織呈現(xiàn)Survivin高表達,顯著高于正常組織,Westernb
3、ot檢測結(jié)果與其基本相符。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)癌變組織的細胞核內(nèi)Survivin表達附近健康組織中表達顯著增強,TUNEL表明在Survivn高表達的癌變組織中細胞凋亡比例顯著低于Survivin低表達的健康組織(P一0.02)。結(jié)論:癌癥組織中Survivin呈現(xiàn)高水平表達,與健康組織有顯著的差異Survivin在胃癌診斷中具有潛在的應用價值。主題詞胃腫瘤/診斷@Survivin【中圖分類號】R735.2【文獻標識碼】A【文章編號11000-7377(201
4、3)12—1579—02凋亡抑制基因(Survivin)凋亡抑制蛋白(IAP)家參及各樣本循環(huán)參數(shù):內(nèi)參Betaactin95℃5s,60℃族的新成員,Survivin蛋白包含了一個由7O個氨基酸20s,72℃20s;TLR4:95℃5s,60℃20s,72℃20s。組成的結(jié)構(gòu)域,在進化上極其保守口]。因為Survivin3Westernblot取冷凍保存的組織,提取蛋在正常組織中的表達水平極低,因此Survivn正逐漸白,定量并進行SDS-PAGE電泳,120伏電泳90min,成為癌癥診斷和預后評價的重要分子標志,并且具有然
5、后200mA2h電轉(zhuǎn)印于PVDF膜上。用封閉液(1成為抗癌靶點的潛力L2]。本研究通過分子生物學和×TBST,5脫脂奶粉)室溫振搖封閉2h,洗膜。加免疫組織化學方法檢測Survivn在胃癌患者癌變組織入兔抗人Survivin一抗(1:200),室溫孵育2h,洗及正常組織中的表達,并探討其在胃癌診斷中的應用。膜,加入HRP標記的羊抗兔IgG(1:2000)室溫孵育材料與方法1.5h,洗膜。最后用ECL化學發(fā)光試劑盒檢測雜交1材料以2009年4月至2012年4月期間信號,在Bio—Rad凝膠儀上成像。前來我院接受手術(shù)治療的50例早
6、期胃癌患者為研究4免疫組織化學將制備好的切片放人60℃恒對象。其中33例男性,17例女性,平均年齡為62.2溫烘箱中烤2h使組織緊密貼片;切片常規(guī)脫蠟至水;歲。在手術(shù)期間分別采集病人的腫瘤組織及其鄰近的30H2O。1份+去離子水1O份混合,室溫5~10rain正常黏膜組織。一部分組織經(jīng)液氮冷凍后于一8O℃保以滅火內(nèi)源性酶,去離子水洗3次;滴加5BSA封閉存?zhèn)溆?。剩余樣品?jīng)10甲醛固定后包埋并制備石液,室溫20min,甩去多余液體,不洗;滴加1:100稀蠟切片。根據(jù)Lauren法對腫瘤進行分類評估并使用釋的一抗,4℃過夜;將玻片
7、從4℃冰箱中取出,37℃復uicc/AJCCTNM方法進行分期。其中33例患者出溫1h,用免疫組化專用PBS洗3次,每次2rain;滴加現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,其余17例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,29例患者為生物素化山羊抗兔IgG,37℃20min;免疫組化專用腸內(nèi)型,21例為擴散型。PBS洗3次,每次2min;滴加試劑SABC,37℃2RT—PCR采用Trizol法提取樣本中的20min;PBS洗4次,每次5min;DAB顯色:使用DABRNA。操作步驟嚴格按照說明書進行。采用簡并引顯色試劑盒。取lml去離子水,加試劑盒中A,B,C物和BBI公司
8、AMVFirstStrandcDNASynthesis試劑各1滴,混勻后加至切片。室溫顯色,鏡下控制反Kit,以總RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈。嚴格按照應時問,約5~6rain,去離子水洗滌;蘇木素復染1~說明書操作,獲得cDNA文庫,用于熒光定量PCR分2rain,自來水返藍25min;常規(guī)脫水透明,中性樹膠封析。熒光定量PCR反應條件為:95℃變性30s后,內(nèi)固;Olympus普通光學顯微鏡下觀察回腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu),通過自動成像系統(tǒng)采圖拍照。通過一個評分系統(tǒng)△廣州醫(yī)科大學基礎學院生物技術(shù)系2009級來反映Survivin的表
9、達水平:染色陽性細胞比例低于158O陜西醫(yī)學雜志2013年12月第42卷第12期5為0分,5~25為1分,25~5O為2分,組織中出現(xiàn)survivin的高表達,但是在部分正常組織5O%~75為3分,大于75為4分,評分低于1分中也發(fā)現(xiàn)Survivin的表達]。也有研究發(fā)現(xiàn)Su