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1、陜西醫(yī)學雜志2013年12月第42卷第12期15'79Survivin表達在胃癌診斷中的作用研究河北冀中能源峰峰集團總醫(yī)院普外一科(邯鄲056200)王彬譚逸然△摘要目的：檢測凋亡抑制基因(Survivin)在胃癌組織中的表達并分析其在胃癌診斷中的意義。方法：采集50例接受手術(shù)的胃癌患者癌變組織及臨近的將抗組織樣本，通過RT—PCR和Westernblot方法檢測SurvivinmRNA和蛋白質(zhì)的表達。使用免疫組織化學方法檢測樣本中Sur—vivn的表達，TUNEL檢測細胞凋亡的狀況。結(jié)果：RT—PCR顯示34(68)例患者的
2、癌變組織呈現(xiàn)Survivin高表達，顯著高于正常組織，Westernb
3、ot檢測結(jié)果與其基本相符。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)癌變組織的細胞核內(nèi)Survivin表達附近健康組織中表達顯著增強，TUNEL表明在Survivn高表達的癌變組織中細胞凋亡比例顯著低于Survivin低表達的健康組織(P一0．02)。結(jié)論：癌癥組織中Survivin呈現(xiàn)高水平表達，與健康組織有顯著的差異Survivin在胃癌診斷中具有潛在的應用價值。主題詞胃腫瘤／診斷@Survivin【中圖分類號】R735．2【文獻標識碼】A【文章編號11000-7377(201
4、3)12—1579—02凋亡抑制基因(Survivin)凋亡抑制蛋白(IAP)家參及各樣本循環(huán)參數(shù)：內(nèi)參Betaactin95℃5s，60℃族的新成員，Survivin蛋白包含了一個由7O個氨基酸20s，72℃20s；TLR4：95℃5s，60℃20s，72℃20s。組成的結(jié)構(gòu)域，在進化上極其保守口]。因為Survivin3Westernblot取冷凍保存的組織，提取蛋在正常組織中的表達水平極低，因此Survivn正逐漸白，定量并進行SDS-PAGE電泳，120伏電泳90min，成為癌癥診斷和預后評價的重要分子標志，并且具有然
5、后200mA2h電轉(zhuǎn)印于PVDF膜上。用封閉液(1成為抗癌靶點的潛力L2]。本研究通過分子生物學和×TBST，5脫脂奶粉)室溫振搖封閉2h，洗膜。加免疫組織化學方法檢測Survivn在胃癌患者癌變組織入兔抗人Survivin一抗(1：200)，室溫孵育2h，洗及正常組織中的表達，并探討其在胃癌診斷中的應用。膜，加入HRP標記的羊抗兔IgG(1：2000)室溫孵育材料與方法1．5h，洗膜。最后用ECL化學發(fā)光試劑盒檢測雜交1材料以2009年4月至2012年4月期間信號，在Bio—Rad凝膠儀上成像。前來我院接受手術(shù)治療的50例早
6、期胃癌患者為研究4免疫組織化學將制備好的切片放人60℃恒對象。其中33例男性，17例女性，平均年齡為62．2溫烘箱中烤2h使組織緊密貼片；切片常規(guī)脫蠟至水；歲。在手術(shù)期間分別采集病人的腫瘤組織及其鄰近的30H2O。1份+去離子水1O份混合，室溫5～10rain正常黏膜組織。一部分組織經(jīng)液氮冷凍后于一8O℃保以滅火內(nèi)源性酶，去離子水洗3次；滴加5BSA封閉存?zhèn)溆?。剩余樣品?jīng)10甲醛固定后包埋并制備石液，室溫20min，甩去多余液體，不洗；滴加1：100稀蠟切片。根據(jù)Lauren法對腫瘤進行分類評估并使用釋的一抗，4℃過夜；將玻片
7、從4℃冰箱中取出，37℃復uicc／AJCCTNM方法進行分期。其中33例患者出溫1h，用免疫組化專用PBS洗3次，每次2rain；滴加現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其余17例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，29例患者為生物素化山羊抗兔IgG，37℃20min；免疫組化專用腸內(nèi)型，21例為擴散型。PBS洗3次，每次2min；滴加試劑SABC，37℃2RT—PCR采用Trizol法提取樣本中的20min；PBS洗4次，每次5min；DAB顯色：使用DABRNA。操作步驟嚴格按照說明書進行。采用簡并引顯色試劑盒。取lml去離子水，加試劑盒中A，B，C物和BBI公司
8、AMVFirstStrandcDNASynthesis試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反Kit，以總RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈。嚴格按照應時問，約5～6rain，去離子水洗滌；蘇木素復染1～說明書操作，獲得cDNA文庫，用于熒光定量PCR分2rain，自來水返藍25min；常規(guī)脫水透明，中性樹膠封析。熒光定量PCR反應條件為：95℃變性30s后，內(nèi)固；Olympus普通光學顯微鏡下觀察回腸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，通過自動成像系統(tǒng)采圖拍照。通過一個評分系統(tǒng)△廣州醫(yī)科大學基礎學院生物技術(shù)系2009級來反映Survivin的表
9、達水平：染色陽性細胞比例低于158O陜西醫(yī)學雜志2013年12月第42卷第12期5為0分，5～25為1分，25～5O為2分，組織中出現(xiàn)survivin的高表達，但是在部分正常組織5O％～75為3分，大于75為4分，評分低于1分中也發(fā)現(xiàn)Survivin的表達]。也有研究發(fā)現(xiàn)Su
