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《副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素基因轉(zhuǎn)錄水平差異研究.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)2014年8月第26卷第8期ZhejiangPrevMed，Aug．2014，Vol26，No．8·761··論著·副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素基因轉(zhuǎn)錄水平差異研究宋啟發(fā)，葉碩，徐景野，朱國良，章丹陽寧波市疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗所，浙江寧波315010摘要：目的運用實時熒光定量PCR檢測24株副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素(TDH)基因轉(zhuǎn)錄水平差異。方法普通PCR法檢測分離自患者、海產(chǎn)品和環(huán)境中的副溶血性弧菌tdh基因，tdh陽性菌株提取細(xì)菌總RNA后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，檢測無DNA污染后定量至同一濃度，采用實
2、時熒光定量PCR同時檢測cDNA產(chǎn)物中tdh基因和內(nèi)標(biāo)基因16SrRNA的ct值，ACt等于tdh的ct值減去16SrRNA的ct值，以ACt值反應(yīng)tdh相對于內(nèi)標(biāo)基因16SrRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果24株副溶血性弧菌的tdhCt值、內(nèi)標(biāo)基因16SrRNACt值和各樣本兩者之差的ACt值結(jié)果范圍分別為18．04～25．95、8．30～10．93和8．28—15．34，ACt最大值與最小值差為7．06，最高轉(zhuǎn)錄水平菌株為最低菌株的133倍(AACt=2∞)。結(jié)論副溶血性弧菌tdh基因轉(zhuǎn)錄水平存在較大差異，該差異性形成的分子機制以
3、及與該菌的致病性的關(guān)系有待進一步研究。關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌；熱穩(wěn)定直接溶血素；轉(zhuǎn)錄；實時熒光定量PCR中圖分類號：R155文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1007—0931(2014)08—0761一o4AstudyondiferenceoftranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysininVibrioparahaemolyticusSONGQi—fa，YEShuo，XUJing—ye，ZHUGuo—liang，ZHANGDan—yangDepartmentofMicrobiology
4、．CentreforDiseaseControlandPreventionofNingboCity，Ningbo，Zhefiang，315010，ChinaAbstract：0bjectiveTomeasurethetranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysingene(TDH)in24strainsofVibrioparahaemolyticus．MethodsTotalRNAwasextractedfromstrainsofVibrioparahaemozyticuswhi
5、chwereisolatedfrompatients．seMoodandenvironment．TheRNAwasprovedTDHpositivewithroutinePCRmethod；thenthereal—timefluorescentuuantitativePCRwascarriedouttoobtainthecycleofthreshold(Ct)ofTHDandinternalstandardof16srRNA．TranscriptionlevelofTHDcomparedwith16srRNAwasdesig
6、natedasACtwhichwascalculatedasCtvalueofTHDminusCtvalueofl6srRNA．ResultsCtvaluesofTHD．16srRNAandthedifferencebetweenthemofthe24strainswas18．04～25．95．8．3010．93and8．28—15．34respectively．ThedifferencebetweenthemaximumandtheminimumofACtwas7．06：thehighesttranscriptionlev
7、elwas133(AACt=2)timesofthelowestone．ConclusionAgreatdiferenceoftranscriptionlevelofTHDinVibrioparahaemolyticashasbeenprovedandfurtherstudyisneededtoclarifythepossiblemolecularmechanismsandrelationshipbetweenthetranscriptionlevelofTHDandpathogenicmechanism．Keywords：
8、V／br／oparahaemoZyt／cus；Thermostabledirecthemolysin；Transcription；Real—timefuorescentquantitativePCR副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是細(xì)菌性食物中毒的重要病原菌之一
