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《副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素基因轉(zhuǎn)錄水平差異研究.pdf》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)2014年8月第26卷第8期ZhejiangPrevMed,Aug.2014,Vol26,No.8·761··論著·副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素基因轉(zhuǎn)錄水平差異研究宋啟發(fā),葉碩,徐景野,朱國良,章丹陽寧波市疾病預(yù)防控制中心微生物檢驗所,浙江寧波315010摘要:目的運用實時熒光定量PCR檢測24株副溶血性弧菌熱穩(wěn)定直接溶血素(TDH)基因轉(zhuǎn)錄水平差異。方法普通PCR法檢測分離自患者、海產(chǎn)品和環(huán)境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh陽性菌株提取細(xì)菌總RNA后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,檢測無DNA污染后定量至同一濃度,采用實
2、時熒光定量PCR同時檢測cDNA產(chǎn)物中tdh基因和內(nèi)標(biāo)基因16SrRNA的ct值,ACt等于tdh的ct值減去16SrRNA的ct值,以ACt值反應(yīng)tdh相對于內(nèi)標(biāo)基因16SrRNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果24株副溶血性弧菌的tdhCt值、內(nèi)標(biāo)基因16SrRNACt值和各樣本兩者之差的ACt值結(jié)果范圍分別為18.04~25.95、8.30~10.93和8.28—15.34,ACt最大值與最小值差為7.06,最高轉(zhuǎn)錄水平菌株為最低菌株的133倍(AACt=2∞)。結(jié)論副溶血性弧菌tdh基因轉(zhuǎn)錄水平存在較大差異,該差異性形成的分子機制以
3、及與該菌的致病性的關(guān)系有待進一步研究。關(guān)鍵詞:副溶血性弧菌;熱穩(wěn)定直接溶血素;轉(zhuǎn)錄;實時熒光定量PCR中圖分類號:R155文獻標(biāo)識碼:A文章編號:1007—0931(2014)08—0761一o4AstudyondiferenceoftranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysininVibrioparahaemolyticusSONGQi—fa,YEShuo,XUJing—ye,ZHUGuo—liang,ZHANGDan—yangDepartmentofMicrobiology
4、.CentreforDiseaseControlandPreventionofNingboCity,Ningbo,Zhefiang,315010,ChinaAbstract:0bjectiveTomeasurethetranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysingene(TDH)in24strainsofVibrioparahaemolyticus.MethodsTotalRNAwasextractedfromstrainsofVibrioparahaemozyticuswhi
5、chwereisolatedfrompatients.seMoodandenvironment.TheRNAwasprovedTDHpositivewithroutinePCRmethod;thenthereal—timefluorescentuuantitativePCRwascarriedouttoobtainthecycleofthreshold(Ct)ofTHDandinternalstandardof16srRNA.TranscriptionlevelofTHDcomparedwith16srRNAwasdesig
6、natedasACtwhichwascalculatedasCtvalueofTHDminusCtvalueofl6srRNA.ResultsCtvaluesofTHD.16srRNAandthedifferencebetweenthemofthe24strainswas18.04~25.95.8.3010.93and8.28—15.34respectively.ThedifferencebetweenthemaximumandtheminimumofACtwas7.06:thehighesttranscriptionlev
7、elwas133(AACt=2)timesofthelowestone.ConclusionAgreatdiferenceoftranscriptionlevelofTHDinVibrioparahaemolyticashasbeenprovedandfurtherstudyisneededtoclarifythepossiblemolecularmechanismsandrelationshipbetweenthetranscriptionlevelofTHDandpathogenicmechanism.Keywords:
8、V/br/oparahaemoZyt/cus;Thermostabledirecthemolysin;Transcription;Real—timefuorescentquantitativePCR副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是細(xì)菌性食物中毒的重要病原菌之一