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《順鉑對人肺腺癌細(xì)胞作用與ERCC1、Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、·764·中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)◇基礎(chǔ)研究◇中國藥理學(xué)會主辦CN34—1206／R，ISSN1009—2501http：／／www．cjcpt．com2013Jul；18(7)：764—768順鉑對人肺腺癌細(xì)胞作用與ERCC1、Bcl一2表達(dá)的相關(guān)性研究金藝鳳，何貝，劉東華，王瑩皖南醫(yī)學(xué)院附屬弋磯山醫(yī)院呼吸內(nèi)科，蕪湖241001，安徽；安慶市立醫(yī)院呼吸內(nèi)科，安慶246000，安徽摘要目的：探討ERCC1、Bcl-2表達(dá)與順鉑作用中圖分類號：R965．2的關(guān)系，進(jìn)而推測ERCC1、Bcl一2在順鉑耐藥中的文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A作用。方法：選擇人肺腺癌細(xì)胞A
2、549及其耐文章編號：1009-2501(2013)07—0764—05DDP細(xì)胞株A549／DDP作為研究對象，采用MTT法檢測A549／DDP細(xì)胞耐藥指數(shù)；免疫細(xì)隨著肺癌發(fā)病率的逐年增加，對于肺癌化療胞化學(xué)方法、RT—PCR方法檢測不同濃度、不同作藥物與耐藥相關(guān)基因的研究已成為近年的熱點(diǎn)。用時(shí)間干預(yù)后細(xì)胞中ERCC1、Bcl一2的表達(dá)。結(jié)以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療方案是治療非小細(xì)胞肺果：10t~g／mLDDP作用12h，A549細(xì)胞中ER—癌的主要藥物。有研究表明，核苷酸交叉修復(fù)互CC1、Bcl一2mRNA表達(dá)開始增高，隨著作用時(shí)間補(bǔ)基因1(Ex
3、cisionrepaircross—complementing的延長，ERCC1、Bcl-2mRNA的表達(dá)逐漸增高，genel，ERCC1)、Bcl一2與腫瘤耐藥相關(guān)。本研究在72h表達(dá)最強(qiáng)。濃度為5~tg／mL的DDP即通過體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞A549，通過不同濃度可刺激A549細(xì)胞中ERCC1、Bcl一2mRNA表達(dá)DDP干預(yù)、DDP干預(yù)不同時(shí)間后ERCC1、Bcl一2水平上升，隨著DDP濃度的增加，其表達(dá)水平逐mRNA表達(dá)的變化，及細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測漸上升，ERCC1民mRNA表達(dá)水平在ERCC1、Bcl一2蛋白表達(dá)的變化，探討ERCC1
4、、20／~g／mL組達(dá)到高峰。與親本細(xì)胞相比，A549／Bcl一2與順鉑的關(guān)系。DDP中ERCC1、Bcl一2表達(dá)明顯增高。結(jié)論：隨1材料與方法著順鉑作用時(shí)間的延長和濃度的增加，A549細(xì)胞中ERCC1、Bcl一2mRNA和蛋白的表達(dá)量增加，1．1主要材料與儀器人肺腺癌細(xì)胞株A549、推測ERCC1、Bcl一2可能參與了順鉑繼發(fā)耐藥的A549／DDP購自南京凱基生物公司；注射用順鉑形成。為山東齊魯制藥廠產(chǎn)品(20rag／支)；Trizol試劑關(guān)鍵詞肺癌；順鉑；耐藥；ERCC1；Bcl一2盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Taq酶，鼠抗人ERCC1抗體、Bcl一2
5、抗體(購自santcruz公司)；全自動酶標(biāo)儀；PTC一150型熱循環(huán)儀(美國MJ公司)；杭州四季2O13一O3—21收稿2013-06—07修回青胎牛血清。安徽省高等學(xué)校省級科學(xué)研究項(xiàng)目(KJ2011B195)1．2引物設(shè)計(jì)與合成ERCC1、Bcl-2及內(nèi)參照金藝鳳，女，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向：肺部腫瘤的診斷與治療。Ei-actin引物由上海生工生物工程有限公司合成。Tel：0553—5739338E-mail：Jingyf0415@yeah．netERCC1上游引物序列為5，-GGCAGTTCAG—王瑩，通信作者，女，本科
6、，主任醫(yī)師，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，研GCTCTAGTGG一3，下游引物序列為5，-究方向：肺部腫瘤的診斷與治療。Tel：0553—5739338E-mail：w19y29h@163．cornCAGCTCCCAAAAAGAAGACG一3，擴(kuò)增片段大中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)2013Jul；18(7)·765·小為271bp；Bcl一2上游引物序列為5'-GGATGC—成cDNA，具體操作按RT—PCR試劑盒說明書進(jìn)CTTTGTGGAACTGT一3，下游引物序列為5，_行。逆轉(zhuǎn)錄總反應(yīng)體系為20L。反應(yīng)在PTC-AGCCTGCAGCTTTGTTTCAT
7、一3，擴(kuò)增片段大150型熱循環(huán)儀上進(jìn)行，94℃3min蛋白變性小為256bp；內(nèi)參照I3一actin上游引物序列為5，一后，加入Taq酶，進(jìn)入熱循環(huán)。ERCC1反應(yīng)條件CTTCTACAATGAGCTGCGTG一3，下游引物序?yàn)椋?4。C變性30S；51℃退火30S；72℃延伸歹Ⅱ?yàn)?，-TCATGAGGTAGTCAGTCAGG一3，擴(kuò)45S，共33個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min。Bcl一增片段大小為305bp。反應(yīng)在PTC一150型熱循2反應(yīng)條件為：94℃變性30S，45。C退火30S；環(huán)儀上進(jìn)行。72℃延伸45S，共33個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸1
8、．3MTT法檢測A549／DDP對DDP的耐藥指5min。J3一actin反應(yīng)條件為：94℃變性30S；數(shù)收集對數(shù)生長期細(xì)胞，制成單細(xì)胞
